ショウジョウバエDNAポリメラーゼεの細胞内での役割

果蝇 DNA 聚合酶 ε 的细胞内作用

基本信息

批准号：
05263215
负责人：
杉野明雄
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、遺伝学が進んでいるショウジョウバエDrosophila melanogasterを用い、DNAポリメラーゼεが高等動物細胞や酵母と同様に存在することを証明し、このポリメラーゼの細胞内での役割を分子遺伝学的に明らかにする。本年度は昨年度の研究でクローニングしたD.melanogaster DNAポリメラーゼεをコードするcDNAの全塩基配列を決定した。またこのcDNAを使って染色体DNAの単離を行った。塩基配列より予想されるDNAポリメラーゼεのアミノ酸配列はSaccharomyces cerevisiaeのDNAポリメラーゼIIの遺伝子(POL2)産物のアミノ酸配列と比較するとN端側半分の所(一般にDNAポリメラーゼドメインと呼ばれている所)で約60%の相同性を示した。しかしC端側約半分のところでは約30%の相同性しか示さなかった。一方、単離した完全長のcDNAを出芽酵母S.cerevisiaeのpo12-9またはpo12-18温度感受性変異株に導入したが酵母のDNAポリメラーゼIIの機能を相補できなかった。このことは、分裂酵母のDNAポリメラーゼII遺伝子でさえ出芽酵母のDNAポリメラーゼIIの機能を相補できなかったことからも、DNAポリメラーゼドメインの相同性が非常に高いだけでは十分ではなく、DNAポリメラーゼIIのC端側半分が恐らく他の蛋白因子と相互作用し、DNA複製に重要な働きをしていることを示すものと考えられる。従って現在は、N-端側半分のD.melanogaster遺伝子とC-端側半分のS.cerevisiae遺伝子からなるchimera遺伝子を作製し、S.cerevisiae po12変異株を相補できるか検討中である。

在这项研究中，我们使用目前正在经历遗传学的果蝇Melanogaster来证明DNA聚合酶ε的存在与较高的动物细胞和酵母一样，我们将阐明该聚合酶的细胞内作用。今年确定了编码D. melanogaster DNA聚合酶ε的cDNA的整个碱基序列（在去年的研究中被克隆）。还使用该cDNA分离了染色体DNA。与基因（POL2）Cerevisiae基因（POL2）产物相比，从基础序列预测的DNA聚合酶ε的氨基酸序列（通常称为N端的一半（通常称为DNA聚合酶结构域））在N端半（通常称为DNA聚合酶结构域）的氨基酸序列显示约60％。但是，仅在C-End的一半处显示了大约30％的同源性。另一方面，将分离的全长cDNA引入了酿酒酵母的萌芽酵母菌的温度敏感突变体中，但无法补充酵母DNA聚合酶II的功能。这表明，即使是裂变酵母的DNA聚合酶II基因，也无法补充DNA聚合酶II在发芽酵母中的功能，因此不足以使DNA聚合酶结构域具有很高的同源性，并且DNA聚合酶II的C端半末期可能与其他蛋白质因子相互作用，可能与其他蛋白质因子相互作用，在DNA中具有重要的作用。因此，我们目前正在开发一个由n端一半中的甲状腺菌基因组成的嵌合基因和C端一半中的酿酒酵母基因，以及它是否可以与S. cerevisiae po12突变体菌株互补。