ヒト細胞DNA中の8-ヒドロキシグアニン除去修復機構に関する研究

人体细胞DNA中8-羟基鸟嘌呤去除修复机制的研究

• 批准号: 09269228
• 负责人: 横田 淳
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09269228/
• 关键词: 8-ヒドロキシグアニン; 酸化傷害; 自然突然変異; DNA修復; DNAグリコシラーゼ

活性酸素によって生じる8-ヒドロキシグアニン(oh8Gua)はDNA中でアデニンとも塩基対を形成するため強い突然変異原性を有する。DNA中のoh8Guaを除去修復する酵素遺伝子として、これまでに大腸菌ではmutM遺伝子が、酵母ではOGG1遺伝子が単離されている。我々は酵母OGG1と相同性の高いESTをプローブとして、HeLa細胞cDNAライブラリーからヒト相同遺伝子(hOGG1遺伝子)を単離した。hOGG1は染色体上3P26.2に位置する遺伝子であり、345アミノ酸をコードし、酵母OGG1蛋白質と38%の相同性を示した。またGST-hOGG1蛋白質は大腸菌mutMmutY欠損株の自然突然変異を抑制した。さらに、精製した蛋白質とoh8Guaを含む合成二本鎖DNAとの反応物をHPLC-ECD解析及びポリアクリルアミドゲル電気泳動することにより、hOGG1蛋白質がoh8GuaDNAグリコシラーゼ活性及びAPリアーゼ活性を有することが示された。また基質特異性の検討により、oh8Guaに対合する塩基がシトシンやチミンの場合にoh8Guaが除去されやすいことが示された。更に詳細な解析のため我々はESTのデータベースを利用してマウスの相同遺伝子(mOgg1遺伝子)も単離した。予想されるアミノ酸配列はhOGG1蛋白質と85%一致した。またmOgg1蛋白質もhOGG1蛋白質と同様なoh8Gua除去修復能を有することが示された。これらの結果からhOGG1及びmOgg1遺伝子は大腸菌mutMや酵母OGG1と同様な機能を有する哺乳類相同遺伝子であることが示唆された。

Active acid element に よ っ て raw じ る 8 - ヒ ド ロ キ シ グ ア ニ ン (oh8Gua) は DNA で ア デ ニ ン と も salt formed を seaborne す る た strong め い suddenly - different original sex を す る. The DNA の oh8Gua を remove repair す る enzyme heritage 伝 son と し て, こ れ ま で に coliform で は mutM heritage 伝 が, yeast で は OGG1 heritage 伝 son が 単 from さ れ て い る. I 々 は yeast OGG1 と identity の high い EST を プ ロ ー ブ と し て, HeLa cDNA ラ イ ブ ラ リ ー か ら ヒ ト same heritage 伝 child (hOGG1 heritage 伝) を 単 from し た. HOGG1 は on chromosome 3 he. 2 position に す る posthumous son 伝 で あ り, 345 ア ミ ノ acid を コ ー ド し, yeast OGG1 protein と の 38% identity を shown し た. Youdaoplaceholder0 GST-hOGG1 protein また mutant muty deficient strain of escherichia coli <s:1> natural sudden variation を inhibition た. さ ら に, refined し た protein と oh8Gua を む synthesis 2 lock DNA と の anti 応 を HPLC - ECD parsing and び ポ リ ア ク リ ル ア ミ ド ゲ ル electric 気 swimming す る こ と に よ り, hOGG1 protein が oh8GuaDNA グ リ コ シ ラ ー ゼ activity and び AP リ ア ー ゼ active を have す る こ と が shown さ れ た. Beg に ま た substrate specificity の 検 よ り, oh8Gua に us seaborne す る salt base が シ ト シ ン や チ ミ ン の occasions に oh8Gua が remove さ れ や す い こ と が shown さ れ た. More に detailed analytical の な た め I 々 は EST の デ ー タ ベ ー ス を using し て マ ウ ス の same heritage 伝 child (mOgg1 heritage 伝) も 単 from し た. When されるア ノ ノ acid is combined with <s:1> hOGG1 protein と85%, it is consistent with た た. Youdaoplaceholder0 mOgg1 protein また hOGG1 protein と the same なoh8Gua removal repair energy を has する とが とが とが shows された. こ れ ら の results か ら hOGG1 and び mOgg1 posthumous son 伝 は coliform mutM や yeast OGG1 と with others な function を have す る mammals survived 伝 same child で あ る こ と が in stopping さ れ た.

项目成果

Arai,K., Yokota,J., et al.: "Cloning of a human homolog of the yeast OGG1 gene that is involved in the repair of oxidative DNA damage." Oncogene. 14. 2857-2861 (1997)

Arai,K.、Yokota,J. 等人：“克隆参与氧化 DNA 损伤修复的酵母 OGG1 基因的人类同源物。”

Kohno,T., Yokota,J., et al.: "Genetic polymorphisms and alternative splicing of the hOGG1 gene,that is involved in the repair of 8-hydroxyguanine in damaged DNA." Oncogene. (in press). (1998)

Kohno,T.、Yokota,J. 等人：“hOGG1 基因的遗传多态性和选择性剪接，参与受损 DNA 中 8-羟基鸟嘌呤的修复。”

Tani,M., Yokota,J., et al.: "Genomic structure and chromosomal localization of the mouse Ogg1 gene that is involved in the repair of 8-hydroxyguanine in DNA damage." Mamm.Genome. 9. 32-37 (1998)

Tani,M.、Yokota,J. 等人：“参与修复 DNA 损伤中 8-羟基鸟嘌呤的小鼠 Ogg1 基因的基因组结构和染色体定位。”

Nagashima,M., Yokota,J., et al.: "Presence of human cellular protein(s)that specifically binds and cleaves 8-hydroxyguanine containing DNA." Mutation Res.383. 49-59 (1997)

Nagashima,M.、Yokota,J. 等人：“存在特异性结合并切割含有 8-羟基鸟嘌呤的 DNA 的人类细胞蛋白。”

Shinmura,K., Yokota,J., et al.: "8-hydroxyguanine(7,8-dihydro-8-oxoguanine)DNA glycosylase and AP lyase activities of hOGG1 protein and their substrate specificity." Mutation Res.385. 75-82 (1997)

Shinmura,K.、Yokota,J. 等人：“hOGG1 蛋白的 8-羟基鸟嘌呤 (7,8-二氢-8-氧代鸟嘌呤)DNA 糖基化酶和 AP 裂解酶活性及其底物​​特异性。”