ヒト巨核球の増殖・分化・成熟機序に関する研究:巨核芽球細胞株による解析

人类巨核细胞增殖、分化和成熟机制的研究：巨核细胞系分析

• 批准号: 03252203
• 负责人: 斎藤 英彦
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03252203/
• 关键词: 巨核芽球細胞株; プロテインキナ-ゼC; トロンビン; プロテインキナ-ゼCインヒビタ-

我々は巨核芽球細胞株(MEGー01)の樹立(Blood66:1384,1985)を報告して以来,本細胞株におけるホルボルエステルによる分化誘導(Blood72:49,1988),分化誘導時のプロテインキナ-ゼCの細胞内局在の変化(J cell Biol107:929,1988),トロンボモジュリンの局在および産生(Thromb Haemostas64:297,1990),細胞内CーAMPによるトロンボモジュリンの発現増強(Thromb Res58:615,1990)など巨核球分化および機能に関する研究に取り組んできた。これらの研究成果に基づき,今年度は新たに以下の研究をまとめた。(Arch Biochem Biophy291:218,1991)。プロテインキナ-ゼC(PKC)は,細胞内カルシウム(Ca)やジアシルグリセロ-ル(DG)の濃度レベルに応じて,細胞膜へ移行し活性化することが知られており,また凝固因子の一つであるトロンビンは血小板のイノシト-ルリン脂質代謝を促進し,細胞内Ca濃度を上昇させることが報告されているので,この巨核球マ-カ-をもつMEGー01細胞において,トロンビン刺激時の細胞内CaとDGのレベルを測定し,PKCの細胞内移行による膜への局在性の変化を免疫化学的手法を用いて経時的に解析した。0.5u/mlのトロンビンで刺激後,15秒でPKCの細胞膜への局在化が認められ,90秒で最高に達した。細胞内でCa濃度も15秒内に急上昇し,60秒で最大となり,10分後もそのレベルで留まった。DGのレベルは二相性で,最初の上昇は15秒内に起こり,60秒後の低下の後,再び10分以上の上昇を維持した。しかしこれらの高値にもかかわらず,PKCの局在は10分後には細胞膜より解離し,細胞質内へ散在していた。PKCインヒビタ-であるH7存在下では,CaやDGの濃度パタ-ンを修飾することなく,PKCの膜への局在化が量的にも時間的にも増強されていた。これらの結果は,トロンビン刺激で細胞内CaやDGレベルが上昇し,PKCが細胞膜へ移行,PKCにより活性化されたシグナル伝達系により更に,PKCのダウンレギュレ-ションが起こることを示している。

Megakaryocyte bud cell line (MEG-01)(Blood66:1384, 1985) Since the report, this cell line has been induced to differentiate.(Blood72:49, 1988), Differentiation induction in the cellular process of transformation (J cell Biol107:929,1988), The Story of the Day (Thromb Haemostas64:297, 1990), Increased development of intracellular C AMP (Thromb Res58:615, 1990) Study of megakaryocyte differentiation and function These research results are based on the past, and the following research will be carried out this year. (Arch Biochem Biophy291:218,1991)。The concentration of PKC (PKC) in the intracellular Ca (Ca) matrix increases, the cell membrane migrates and activates, and the coagulation factor promotes platelet lipid metabolism. The intracellular Ca concentration increases. MEG-01 cells were stimulated with PKC, and intracellular Ca and DG levels were measured. PKC intracellular migration was characterized by changes in membrane properties. Immunochemical methods were used to analyze the changes in intracellular Ca and DG. After stimulation with 0.5u/ml, PKC membrane degradation was observed in 15 seconds and reached the highest level in 90 seconds. Intracellular Ca concentration rises rapidly within 15 seconds, reaches maximum after 60 seconds, and then remains unchanged after 10 minutes. DG is biphasic, initially rising within 15 seconds, then falling after 60 seconds, then rising for more than 10 minutes. After 10 minutes,PKC was dissociated from the cell membrane, and the cytoplasm was dispersed. In the presence of PKC, the concentration of Ca ~(2 +)-DG was modified, and the concentration of PKC in the membrane was increased. In response to these results, intracellular Ca ~(2 +), DG ~(2 +), PKC ~(2 +), PKC ~(2

项目成果

Towatari,M.: "Absense of the human retionoblastoma gene product in the megakaryoblastic crisis of chronic myelogenous leukemia." Blood. 78. 2178-2181 (1991)

Towatari,M.：“慢性粒细胞白血病巨核细胞危象中人类视网膜母细胞瘤基因产物的缺失。”

Okumura,M.: "Expression of Hーrelated antigen on human megakaryocytes and megakaryocytic leukemia cells." Int J Hematol. 54. 151-158 (1991)

Okumura, M.：“H 相关抗原在人巨核细胞和巨核细胞白血病细胞上的表达。”Int J Hematol。54。151-158（1991）

Watanabe,T.: "Characterization of prostaglandin and thromboxane receptors expressed on a megakaryoblastic leukemia cell line,MEGー01s." Blood. 78. 2328-2336 (1991)

Watanabe，T.：“巨核细胞白血病细胞系 MEG-01s 上表达的前列腺素和血栓素受体的表征。血液”78。2328-2336（1991）

Takeuchi,K.,: "Production of plateletーlike particles by a human megakaryoblastic leukemia cell line (MEGー01)." Exp Cell Res. 193. 223-226 (1991)

Takeuchi, K.，：“人巨核细胞白血病细胞系 (MEG-01) 的血小板样颗粒的生产。Exp Cell Res。”193. 223-226 (1991)

Murata,T.: "Aphidicolin,an inhibitor of DNA replication,blocks the TPAーinduced differentation of a human megakaryoblastic cell line,MEGー01." Blood. 78. 3168-3177 (1991)

Murata, T.：“Aphidicolin 是一种 DNA 复制抑制剂，可阻断 TPA 诱导的人类巨核细胞系 MEG-01 的分化。” 78. 3168-3177 (1991)