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(1、3)‐β‐D‐グルカン感受性プロテアーゼチモ-ゲンの活性化機構

(1,3)-β-D-葡聚糖敏感蛋白酶原激活机制

基本信息

批准号：
06680589
负责人：
牟田達史
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

カブトガニ血球細胞よりβ‐グルカン感受性プロテアーゼチモ-ゲンであるG因子を精製し、α、β両サブユニットの部分アミノ酸配列をもとに、それぞれのサブユニットをコードするcDNAを単離した。得られたcDNAの塩基配列を決定したところ、βサブユニットはセリンプロテアーゼ前駆体の構造をもつのに対し、αサブユニットは細菌由来のGlucanaseやXylanaseに含まれる繰り返し構造を含む新しいタイプのモザイクタンパク質であることが判明した。さらに、精製タンパク質を用いてG因子の活性化機構を検討したところ、β‐グルカンとの接触により、αサブユニットのGlucanase様ドメイン内のArg151‐Glu152と、βサブユニット内のセリンプロテアーゼドメインのアミノ末端にあたるArg15‐Ile16が切断されることが明らかとなった。いずれも、Arg‐Xの配列が水解されるが、トリプシン等のプロテアーゼでは全く活性化が起きなかったことから、β‐グルカンとの接触が活性化に必須であることが判明した。β‐グルカンによる活性化の特異性を調べたところ、直鎖状のβ‐グルカンが最も高いG因子活性化能を示し、(1→4)‐β、(1→6)‐βなどの分岐構造は活性化能を低下させた。G因子活性化の際のβ‐グルカンの濃度依存性について検討したところ、活性化におけるβ‐グルカンの濃度には至適値が存在し、高濃度のβ‐グルカン存在化ではかえって活性化は阻害された。このβ‐グルカンの至適濃度は、G因子の濃度を変えると、それに従って変動し、両者の比が活性化に重要であることが明らかになった。以上の結果より、G因子はαサブユニットにβ‐グルカンが結合することによって惹起されるコンフォメーション変化に伴う、G因子間の相互作用により、両サブユニットに切断を生じつつ活性化するものと考えられる。

The G factor is purified, α and β are selected from the group consisting of a number of amino acid sequences, and the cDNA sequence is selected from the group consisting of a number of amino acid sequences. The structure of the precursor of the cDNA was determined. The structure of the precursor of the cDNA was determined. The activation mechanism of G factor was studied in detail. Arg151-Glu152 in the glucosidase analysis of α-, β-, α-, β-, It is necessary to identify the activation of Arg-X and Arg-X in order to activate them. The specificity of activation of β-linked molecules is modulated, and the activity of G factor is highest in β-linked molecules, and lower in (1→4)-β and (1→6)-β-linked molecules. The concentration dependence of β-glucagon during G factor activation is investigated. The concentration of β-glucagon during activation is determined to be appropriate. The existence of β-glucagon at high concentration is determined by the inhibition of activation. The optimum concentration of β-factor is different from that of G-factor, and the ratio of β-factor to G-factor is important. The above results show that the G factor α has a negative effect on the β-cell interaction, and the G factor α has a negative effect on the β-cell interaction.