減数分裂時に誘導されるDNA複製開始能の分子的実体とその抑制機構

减数分裂过程中诱导DNA复制起始能力的分子实体及其抑制机制

• 批准号: 09264215
• 负责人: 加藤 順也
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Nara Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09264215/
• 关键词: アフリカツメガエル; 卵成熟; サイクリン; サイクリン依存キナーゼ; E2F; DNA複製能; 減数分裂

体細胞分裂のDNA複製開始を制御することが判明しているG1制御因子(Cdkインヒビター、cyclinD、cyclinE、cdk4、cdk2、E2F-1、DP-1、pRbなど)が、減数分裂過程中、MI期にて誘導されるDNA複製能に関与する可能性を検討するために、それぞれの組み換え蛋白質を大腸菌およびバキュロウイルスの発現系を用いて発現・精製し、未成熟卵にマイクロインジェクション後、卵生熟やDNA複製開始能の誘導に与える効果を解析した。その結果、ドミナントネガティブE2F、あるいは、Cdkインヒビターを用いた実験から、カエル卵に存在するE2F様因子とCdk2活性が、MI期にて誘導されるDNA複製能に関与する結果を得た。また、E2F-1とサイクリンEを導入した場合、それぞれ単独では効果が見られなかったが、同時に注入するとDNA複製の開始を誘導した。この結果は、カエル卵においては、E2F活性のみでは不十分であるが、サイクリンE/Cdk2複合体と協調するとDNA複製開始を誘導できること、この系においてはサイクリンEの発現はE2Fに依存しないこと、さらにはE2Fの標的遺伝子にサイクリンE以外のものが存在することを示している。カエル卵においては、ほとんどの蛋白質の発現はすでに存在しているmRNAのpolyA付加により制御されることが知られているので、外部から導入した転写因子により活性化された遺伝子を同定するには理想的な系である。この利点を生かし、E2FとサイクリンEを注入した卵と、未処理卵からRNAを抽出し、ディファレンシャルディスプレイ法によりその発現が特異的に上昇した遺伝子の断片を4種類同定した(仮称 CET-1、-2、-3、-4)。このうち比較的強く誘導された遺伝子断片(CET-1と2)をクローニングし、現在、完全長のcDNAを単離し、解析中である。

G1 regulatory factors have been identified for the regulation of DNA replication initiation in somatic cell division.(Cdk_1, cyclinD, cyclinE, cdk_4, cdk_2, E2F-1, DP-1, pRb)~ After immature eggs mature and DNA replication begins, they can be induced and analyzed. The results showed that the E2F factor and Cdk2 activity were related to the induction of DNA replication during MI phase. E2F-1 and E2F-1 are introduced into the system, and the results of the injection are consistent with the initiation of DNA replication. The results showed that the activity of E2F was not very high, and the coordination of E/Cdk2 complex and induction of DNA replication began. The system showed that the occurrence of E/Cdk2 complex was dependent on E/Cdk2 complex and the existence of E/Cdk2 target gene. It is known that the expression of proteins in large proteins is controlled by the polyA addition of mRNA, and this is an ideal system for the activation of genes by externally introduced transcription factors. There are four kinds of isozymes (CET-1,-2,-3,-4) in which the gene fragments are isolated from untreated eggs, RNA is extracted from untreated eggs, and the gene fragments are isolated from untreated eggs. The strong induction of cDNA fragments (CET-1 and CET-2) in this study is related to the development of cDNA fragments, including cDNA fragments, and cDNA fragments.