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多因子遺伝子性循環器疾患の遺伝子解析へのDNAチップ技術の応用

DNA芯片技术在多因素遗传性心血管疾病遗传分析中的应用

基本信息

批准号：
11877119
负责人：
荻原俊男
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11877119/
关键词：
遺伝子多型マイクロアレイ疾患感受性 SNPs 高血圧 TaqMan プローブ ASO

项目摘要

多くの検体を迅速、正確、安価に処理できる技術の確立を図るため、本研究では「生活習慣病の遺伝子多型解析のための技術革新」を目的としている。本年度も共同研究施設へのDNAマイクロアレイ装置の導入が見送られたため、TaqManケミストリー法を応用したASO(allele specific oligonucleotide hybridization)による半自動遺伝子型決定法の確立を中心に検討した。本法では、プライマーとプローブの設計と、至適温度条件の設定が最も重要であり、極端にGC richな領域や単塩基の連続した配列には不向きであることが判明したが、本法のランニングコストは、ゲル電気泳動が不用で、制限酵素処理も必要としないことから、むしろ従来の制限酵素断片長多型よりも安く、1検体あたり50〜100円程度、実験時間は約1/10に短縮可能であった。500検体をPCR-RFLPとTaqMan PCR法の両者で検討した結果、1例の相違も認められず、再現性、信頼性は良好であった。アンジオテンシノーゲン遺伝子(AGT)のT235アリルは高血圧感受性を高めることが知られているが、我々はこれと完全な連鎖不平衡にあるAGT/T+31C多型を4,000人規模の一般集団で検討し、同多型が高血圧家族歴と関連があることを示した(Hypertension,2001,in press)。岩手県で実施中の農村部地域住民の大規模コホート研究では、東北大学倫理委員会の承認を得て、24時間血圧変動と関連する遺伝因子、高血圧に起因する合併症と関連する遺伝因子をTaqMan PCR法を用いて検討中であり、同多型がnon-dipper型と関連することや、無症候性脳梗塞と各種遺伝子多型が血圧とは独立して関連することなどの検討結果を得ている。

Multi-body medicine is rapid, correct and safe. In this study, the purpose of this study is to analyze the polymorphisms of patients with diseases and diseases in life. This year, the joint research and construction of DNA equipment has been implemented, and the TaqMan testing method has been used to determine the semi-automatic performance of the ASO (allele specific oligonucleotide hybridization) cluster. In this method, the most important equipment is set to the temperature condition, the most important one is set to the temperature condition, the most important one is used to set the temperature condition, the terminal GC rich is used to determine the temperature in the field, the equipment is not used to determine the temperature, the temperature is not required for the electrophoretic swimming, and the restriction enzyme system is necessary to determine the temperature. The restriction enzyme fragments are long, multi-type and safe, the temperature is 50 to 100 degrees in one body, and the time is about 1 to 10 years in short time. The results of 500-year-old PCR-RFLP TaqMan PCR method showed that the results were good, and 1 case had good sex and confidence. We don't know if there is a complete imbalance in AGT/T+31C polymorphisms. We know that there is a complete imbalance in AGT/T+31C polymorphisms. The family model of 4000 people with the same type of high blood pressure is not susceptible to high blood pressure. It shows that the family members of the same type have the same blood pressure. The large-scale study of residents of the Ministry of Agriculture in Iwate, the Committee of Management Committee of North University, the 24-hour blood cycle, the cause of hypertension, the etiology of syndromes, and the TaqMan PCR method were used in the study of large-scale residents of the Ministry of Agriculture, Beijing University, Beijing University, 24 hours, 24 hours, and so on. TaqMan PCR method was used in the study, the same type, and the same type. In patients with asymptomatic infarct, there were multiple blood types in each patient, and the results were satisfactory.