マウス初期発生におけるWntシグナルの受容機構の解析

小鼠早期发育过程中Wnt信号接收机制分析

• 批准号: 12026216
• 负责人: 高田 慎治
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12026216/
• 关键词: 発生; 受容体; マウス; Frizzled; 細胞間相互作用; Wnt

脊椎動物には少なくとも18個のWntが存在し、その受容体としてはFrizzledが考えられているが。直接的な証明はまだない。本研究では、我々がクローニングした新規Frizzled遺伝子に着目し、その発現パターンの解析、Wntタンパク質に対する結合能の解析、ならびにノックアウトマウスの表現型の解析から、このFrizzled遺伝子がWntの受容体として機能しているかどうかについて検討した。マウス胚における発現パターンの解析の結果、この遺伝子の発現はWnt-3aを含む多くのWnt遺伝子の発現と良く対応していた。次に、Frizzled-10が実際にWntタンパク質と物理的に相互作用するかどうかを調べるため、HEK293細胞にFrizzled-10遺伝子の細胞外ドメインおよびWnt-3a遺伝子を強制発現し免疫沈降したところ、両者が共沈することが確認され、Frizzled-10はその細胞外ドメインを介してWnt-3aと結合する能力があることが示された。さらに、Frizzled-10ノックアウトマウスを作製しその表現型を解析したところ、ホモ変異体はほぼメンデルの法則に沿った比率で出生したが、ほとんど個体でWnt-3a変異体マウスの表現型である尾の屈曲が観察された。以上のことからFrizzled-10がマウスの形態形成過程においてWnt-3a受容体として働いている可能性が示唆された。しかしながら、ここで観察されたFrizzled-10ホモ変異体におけるWnt-3a変異体様の表現型は、その機能を完全に欠失させた変異体(null allele)のものに比べ軽微であり、実際の発生過程においてはFrizzled-10以外にもWnt-3a受容体として働いている分子があることが考えられた。

Vertebrate に は less な く と も 18 の Wnt が し, そ の by let body と し て は Frizzled が exam え ら れ て い る が. The direct な proves that まだな まだな まだな. This study で は, I 々 が ク ロ ー ニ ン グ し た new rules Frizzled heritage 伝 に the mesh し, そ の 発 now パ タ ー ン の parsing, Wnt タ ン パ ク qualitative に す seaborne る binding energy の parsing, な ら び に ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス の phenotype の parsing か ら, こ の Frizzled heritage 伝 son が Wnt の by let body と し て function し て い る か Youdaoplaceholder6 う に に に て検 て検 て検 て検 ask for た. マ ウ ス embryo に お け る 発 now パ タ ー ン の analytical の results, こ の posthumous son 伝 の 発 now は Wnt - 3 - a を containing more than む く の Wnt posthumous son 伝 の 発 と now good く 応 seaborne し て い た. に, Frizzled - 10 が be interstate に Wnt タ ン パ ク qualitative と physical に interaction す る か ど う か を adjustable べ る た め, HEK293 cells に Frizzled - 10 heritage 伝 son の extracellular ド メ イ ン お よ び Wnt - 3 - a legacy 伝 son を 発 し immune sink now compulsory し た と こ ろ, who struck が shen す る こ と が confirm さ れ, Frizzled - 10 は そ の extracellular ド メ イ ン を interface し て Wnt - 3 - a と combining す る ability が あ る こ と が shown さ れ た. さ ら に, Frizzled - 10 ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス を cropping し そ の phenotype を parsing し た と こ ろ, ホ モ - variant は ほ ぼ メ ン デ ル の law に along っ た ratio で born し た が, ほ と ん ど individual で Wnt - 3 - a - variant マ ウ ス の phenotype で あ る tail の buckling が 観 examine さ れ た. Above の こ と か ら Frizzled - 10 が マ ウ ス の morphogenetic process に お い て Wnt - 3 a by let body と し て 働 い て い が る possibility in stopping さ れ た. し か し な が ら, こ こ で 観 examine さ れ た Frizzled - 10 ホ モ - variant に お け る Wnt - 3 - a - with others の phenotype は, そ の function を entirely に owe lost さ せ た - variants (null Allele) の も の に than べ 軽 micro で あ り, be interstate の 発 birth process に お い て は Frizzled - 10 outside に も Wnt - 3 a by let body と し て 働 い て い る molecular が あ る こ と が exam え ら れ た.

项目成果

Sakamoto,I.,Kishida,S.,Fukui,A.,Kishida,M.,Yamamoto,H.,Hino,Si.,Michiuo,T.,Takada,S.,Asashima,M.,& Kikuchi,A.: "A novel beta-catenin-binding protein inhibits beta-catenin-dependenttcf activation and axis formation."J Biol Chem.. 275. 32871-32878 (2000)

坂本 I.、岸田 S.、福井 A.、岸田 M.、山本 H.、日野 Si.、道雄 T.、高田 S.、浅岛 M.、

Hinoi,T.,Yamamoto,H.,Kishida,M.,Takada,S.,Kishida,S.,& Kikuchi,A.: "Complex Formation of Adenomatous Polyposis Coll Gene Product and Axin Facilltates Glycogen Synthase Kinase-3 beta-dependent Phosphorylation of beta-Catenin and Down-regulates beta-Caterni

日井T.、山本H.、岸田M.、高田S.、岸田S.、

Hino,S.-I.,Kishida,S.,Michiue,T.,Fukui,A.,Sakamoto,I.,Takada,S.,Asashima,M.& Kikuchi,A.: "Inhibition of the Wnt signaling pathway by Idax, a novel Dvl-binding protein."Mol.Cell.Biol.. 21. 330-342 (2001)

日野 S.-I.、岸田 S.、道上 T.、福井 A.、坂本 I.、高田 S.、浅岛 M.

Takeda,K.,Yasumoto,K,Takada,R.,Takada,S.,Watanabe,K.,Udono,T.,Saito,H.,Takahashi,K.,Shibahara,S.: "Induction of melanocyte-specific microphthalmia-associated transcription factor by Wnt-3a"J.Biol.Chem.. 275. 14013-14016 (2000)

武田，K.，安本，K，高田，R.，高田，S.，渡边，K.，Udono，T.，齐藤，H.，高桥，K.，芝原，S.：“黑素细胞特异性的诱导

Takeuchi,S.,Takeda,K.,Oishi,I.,Nomi,M.,Ikeya,M.Itoh,K.,Tamura,S.,Ueda,T.,Hatta,T.,Otari,H.,Terashima,T.,Takada,S.,Yamamura,H.,Akira,S.& Minami,Y.: "Mouse Ror2 receptor tyrosine kinase is requird for the heart development and limb formation."Genes Cells. 5

竹内S.、武田K.、大石I.、能美M.、池谷M.伊藤K.、田村S.、上田T.、八田T.、小谷H.、寺岛