Wntリガンドの動態計測に基づく組織発生機構の解析

基于Wnt配体动力学测量的组织发育机制分析

• 批准号: 21H02498
• 负责人: 高田 慎治
• 金额: $ 11.15万
• 依托单位: National Institutes of Natural Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H02498/
• 关键词: 遺伝子; 細胞; 発生・分化; シグナル伝達; 発生

本研究では、分泌シグナルの拡散状態の違いに注目し、それを生み出す分子機構とその生物的意義を検討することを研究の中心に据え、以下の３つの問いを設定している。(1) 複数の複合体構造や異なる拡散性を取りうるという特徴は、Wntの種類や発現細胞の違いに関わらず共通にみられることか、それとも多様性があるのか。(2)拡散性が異なる状態への移行はどのように制御されるのか。(3)低拡散状態と高拡散状態の各々が持つ生物学的意義とは何か。これらの問いに対して、今年度に得られた主たる成果は以下のとおりである。(1) 内在のWntが実際に複合体を形成するのかを検討するために、Wnt3aが発現することが知られている胎生７日相当のエピブラストを誘導する培養系の確立を試みた。しかしながら、誘導効率が十分ではなく、目的とする細胞を効率よく誘導するための条件検討を引き続き行う予定である。 (2) ゲノム編集により樹立した内在のWntに蛍光蛋白を付加さたノックインフィッシュを用いて、内在性Wntの観察・測定を引き続き行った。その結果、蛍光付きタンパク質は比較的高い拡散能を有していることが蛍光相関分光解析より明らかになったが、その一方で実際にWntが付加した蛍光タンパク質の拡散が本当に高いのかどうかについてはより慎重な解析が必要であるとの結論に達した。(3) 前年度までの解析により、WntおよびsFRPの種類により相互の結合性が異なることが示されたことから、その特異性の意義を培養細胞系とアフリカツメガエルの初期胚を用いて解析した。その結果、WntとsFRPが複合体形成することと、細胞膜表面への親和性の間には相関関係があり、sFRPと複合体を形成することによってWntは細胞膜上の特定タンパク質(HSPG)と結合するものと考えられた。さらに、HSPGと Wnt3aとの結合性を免疫沈降法により確認した。

This study focuses on the molecular mechanism of secretion and release of secretion. The meaning of living things is based on the research center's research center, and the following questions are set up. (1) Plural complex structure is different and the dispersion property is different and the type of Wnt is different. Nowadays, the common cells of the cells are the common ones, the common ones, and the common ones. (2) The state of dispersion is different and the state is transferred and controlled. (3) Each of the low-dispersion state and the high-dispersion state has biological significance and significance. This year's results are as follows: (1) Inner Wnt complex is formed and Wnt3a is present.ることが知られているviviparous 7 days is equivalent to のエピブラストをinduced するcultivated system and established をtestみた.しかしながら, induction efficiency が十ではなく, purpose とするcell をefficiency inducing するためのconditions ask をinduced き続き行う下注である. (2)ゲノムCompilationによりEstablishmentした内のWntに蛍光proteinをFU加さたノックインフィッシュを用いて, intrinsic Wntの禳Observation・determination を cited き続き行った.そのRESULT, 蛍光发きタンパクqualityは comparatively high い拡San energy を有していることがoptical correlation spectroscopy九にWntが福加した蛍光タンパク性の拡sanが本道に高いのかどうかについてはよりcautious analysisがnecessaryであるとのconclusionに达した. (3) Analysis of the previous year's analysis, Wnt's FRP type, mutual combination, different combinations, and performance.れたことから, そのspecificityのmeaningをcultured cell line とアフリカツメガエルのInitial embryo をanalyzed by いてした.その results, Wnt とsFRP が complex formation することと, cell membrane surface への affinity の中には correlation relationship があり, sFRP The と complex is formed by combining a specific sterile substance (HSPG) on the cell membrane with the することによってWnt.さらに, HSPG, Wnt3a, and binding properties were confirmed by immunoprecipitation method.

项目成果

Different modification states of heparan sulfate proteoglycans are differently involved in spatial distribution of Wnt11 and in feedback regulation of planar cell polarity

硫酸乙酰肝素蛋白多糖的不同修饰状态不同程度地参与Wnt11的空间分布和平面细胞极性的反馈调节

• 发表时间: 2022
• 作者: M. Suzuki;S. Takada;Y. Mii
• 通讯作者: Y. Mii

Mutual regulations between Wnt11 and core PCP components establish planar cell polarity.

Wnt11 和核心 PCP 成分之间的相互调节建立了平面电池极性。

• 发表时间: 2022
• 作者: Y Mii;M Suzuki;H Koyama;R Takada;M Matsuyama;T Fujimori;S Takada
• 通讯作者: S Takada

エクスター大学(英国)

埃克塞特大学（英国）

Quantitative analysis of diffusing population of endogenous Wnt8 protein in zebrafish

斑马鱼内源性Wnt8蛋白扩散群体的定量分析

• 发表时间: 2022
• 作者: Yabe T.;Mii Y. and Takada S.
• 通讯作者: Mii Y. and Takada S.

Role of paracrine Wnt signaling in body axis elongation of mouse embryos

旁分泌Wnt信号在小鼠胚胎体轴伸长中的作用

• 发表时间: 2022
• 作者: Kikuchi Akira;Takagi Junichi;Takada Shinji;Ishitani Tohru;Minami Yasuhiro;S. Takada
• 通讯作者: S. Takada