新規小胞体膜ユビキチンリガーゼの基質探索と神経生理機能特定

新型内质网膜泛素连接酶的底物搜寻及神经生理功能鉴定

• 批准号: 21659013
• 负责人: 上原 孝
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659013/
• 关键词: 小胞体; ユビキチン; ユビキチンリガーゼ; ストレス; 細胞死; 小胞体ストレス; 神経変性疾患; リガーゼ; 基質; 質量分析; 神経細胞

私たちはこれまでにヒトゲノム情報から推定上の新規な小胞体膜に存在するユビキチンリガーゼの特定を行なってきた.その生理あるいは病態生理的特徴を解明するために,基質の同定を試みた,まず,動物細胞内に当該ユビキチンリガーゼを強制発現させ,特異的抗体により免疫沈降反応を行った.免疫沈降物をSDS-PAGEで展開し,ゲルを染色した後,得られたバンドを切り出して酵素処理した.これらをMALDI TOF/MASS解析し,蛋白質を特定した.数種の候補蛋白質が単離されたが,その一つはインスリン分解酵素(IDE)であった.IDEは末梢ばかりでなく中枢神経系にも高発現している,さらには脳内ではアルツハイマー病発症に関わるAβの分解に寄与していることが明らかとなっている.そこでこのユビキチンリガーゼとIDEの関係の詳細を調べた.両者を神経細胞で強制発現させた際に結合が観察されたが,ユビキチンリガーゼ単独で発現した際にも内在性のIDEと強く結合することから,両者の結合は非常に強いものであることがわかった.さらには,このときIDEはポリユビキチン化されることを見いだした.また,このユビキチン鎖はLys48結合であることを特異的抗体から明らかにした,さらに,内在性IDEはHRD1を過剰発現させることで急速に分解されることを明らかにした,逆に,HRD 1をノックダウンさせるとIDEの半減期は有意に延長されることがわかった.今後は,さらに本研究を発展させ,ヒト病態におけるタンパク質量の変化を明らかにし,神経変性疾患発症との関わりについて明らかにする予定である.

The information on the new cell membrane is estimated to be available in the future. The physiological characteristics of the disease are analyzed, and the substrate is tested for identity. In animal cells, when the disease is stressed, specific antibodies are produced and immune sedimentation reactions occur. The immune precipitates are developed by SDS-PAGE, stained, and then cut out and processed with enzymes. MALDI TOF/MASS analysis, protein specificity. Several candidate proteins are isolated from each other, and one of them is an enzyme (IDE).IDE is highly developed in the central nervous system, and the other is related to the decomposition of Aβ. Details of the relationship between the IDE and the IDE are adjusted. When the brain cell is stressed, the combination is detected, and the combination is very strong when the brain cell is stressed. This is the first time I've seen you. In addition, the HRD1 has a rapid decomposition, and the IDE half-life is intentionally prolonged. In the future, this study will be developed, and the quality of pathological changes will be clearly defined, and the relationship between the development of neurological diseases and changes in quality will be determined.

项目成果

SSPRY domain-containing SOCS box protein-I (SPSB1), SPSB2, and SPSB4 are master regulators of proteasome-dependent degradation of iNOS.

含有 SSPRY 结构域的 SOCS 盒蛋白-I (SPSB1)、SPSB2 和 SPSB4 是蛋白酶体依赖性 iNOS 降解的主要调节因子。

• 发表时间: 2011
• 期刊: J.Biol.Chem.
• 作者: Nishiya;T.
• 通讯作者: T.

Sustained activation of ERK signaling in astrocytes is critical for neuronal injury-induced monocyte chemoattractant protein-1 production in rat corticostriatal slice cultures

• DOI: 10.1111/j.1460-9568.2010.07160.x
• 发表时间: 2010-04-01
• 期刊: EUROPEAN JOURNAL OF NEUROSCIENCE
• 影响因子: 3.4
• 作者: Katayama, Takahiro;Sakaguchi, Emi;Minami, Masabumi
• 通讯作者: Minami, Masabumi

Sustained activation of ERK signaling in estrocytes is critical for neuronal injury-induced monocyte chemoattractant protein-1 production in rat corticostriatal slice cultures.

雌激素细胞中 ERK 信号的持续激活对于大鼠皮质纹状体切片培养物中神经元损伤诱导的单核细胞趋化蛋白-1 的产生至关重要。

• 发表时间: 2010
• 期刊: Eur.J.Neurosci.
• 作者: Katayama;T.
• 通讯作者: T.

実験医学増刊号「活性酸素シグナルと酸化ストレス研究最前線」

实验医学特刊《活性氧信号与氧化应激研究前沿》

• 发表时间: 2009
• 作者: Uehara;T.;上原孝;上原孝;上原孝;上原孝;上原孝
• 通讯作者: 上原孝

Detection of oxidized protein-disulfide isomerase with a specific antibody

用特异性抗体检测氧化蛋白二硫键异构酶

• 发表时间: 2010
• 作者: Uehara;T.;上原孝;西屋禎;改田祐子;Takashi Uehara
• 通讯作者: Takashi Uehara