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受容体から核へcAMPシグナルを伝達するAキナーゼの細胞内ソーティング

受容体から核へcAMPシグナルを伝達するAキナーゼの細胞内ソーティング
将 cAMP 信号从受体传递到细胞核的 A 激酶的细胞内分选
批准号：
06670104
负责人：
萩原 正敏
金额：
$1.47万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1994 至 --
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670104/
关键词：
cAMPAキナーゼCREB

项目摘要

项目成果

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中文摘要
翻译
cAMPによって活性化されたAキナーゼはCREBのSer-133を燐酸化する。この燐酸化によってCREBは活性化型となりCRE遺伝子の転写を亢進させる。このようなモデルが成立するためには細胞質に存在するとされるAキナーゼと、核内に存在するCREBがどこかで出会わなければならない。もともとcAMPは細胞膜上のアデニレートシクラーゼによって合成されるので、cAMPシグナルは細胞膜から核内までの空間的乖離を越えて伝達されねばならない。こうした機構がCREBの転写活性化に関与しているかどうか調べるため次に述べるような実験を行った。調節サブユニットをロ-ダミンで、触媒サブユニットをFITCでそれぞれ標識した後、会合させて作ったホロ酵素をマイクロインジェクションした。会合した分子内ではFITCとロ-ダミンが近接するため干渉が起こるが、解離した後は干渉が解けて本来のemission waveに戻ることを利用している。筆者らはこの方法によって、Aキナーゼがフォルスコリン添加後10分程で活性化され、解離した触媒サブユニットが20分程で核内に移行することをつきとめた。CREBの燐酸化が30分でピークを迎え、転写活性化が1時間ほどで最大になるなど、一連の事象の時間軸は非常に良く符合した。われわれれの用いた2重標識法は細胞内で複合体を作って生理活性が調節されているような分子、例えばサイクリンなどの研究にも汎く応用可能な方法であると思われる。cAMP系では今後、Aキナーゼ触媒サブユニットの核内移行機構のメカニズムを明らかにする必要がある。最近MAPキナーゼなどでも核内への移行が報告されており、蛋白質燐酸化酵素の核内局在化機構はますます重要なトピックスになると思われる。
英文摘要
cAMPによって活性化されたAキナーゼはCREBのSer-133を燐酸化する。この燐酸化によってCREBは活性化型となりCRE遺伝子の転写を亢進させる。このようなモデルが成立するためには細胞質に存在するとされるAキナーゼと、核内に存在するCREBがどこかで出会わなければならない。もともとcAMPは細胞膜上のアデニレートシクラーゼによって合成されるので、cAMPシグナルは細胞膜から核内までの空間的乖離を越えて伝達されねばならない。こうした機構がCREBの転写活性化に関与しているかどうか調べるため次に述べるような実験を行った。調節サブユニットをロ-ダミンで、触媒サブユニットをFITCでそれぞれ標識した後、会合させて作ったホロ酵素をマイクロインジェクションした。会合した分子内ではFITCとロ-ダミンが近接するため干渉が起こるが、解離した後は干渉が解けて本来のemission waveに戻ることを利用している。筆者らはこの方法によって、Aキナーゼがフォルスコリン添加後10分程で活性化され、解離した触媒サブユニットが20分程で核内に移行することをつきとめた。CREBの燐酸化が30分でピークを迎え、転写活性化が1時間ほどで最大になるなど、一連の事象の時間軸は非常に良く符合した。われわれれの用いた2重標識法は細胞内で複合体を作って生理活性が調節されているような分子、例えばサイクリンなどの研究にも汎く応用可能な方法であると思われる。cAMP系では今後、Aキナーゼ触媒サブユニットの核内移行機構のメカニズムを明らかにする必要がある。最近MAPキナーゼなどでも核内への移行が報告されており、蛋白質燐酸化酵素の核内局在化機構はますます重要なトピックスになると思われる。
期刊论文(8)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
萩原 正敏: "蛋白質燐酸化酵素の細胞内ソーティングと転写調節" 現代医学. 41(3). 595-599 (1994)
Masatoshi Hagiwara：“蛋白质磷酸化酶的细胞内排序和转录调控”现代医学 41(3) 595-599 (1994)。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
萩原 正敏: "cAMPシグナルとCREB/ATF" 臨床科学. 30(3). 327-331 (1994)
Masatoshi Hagiwara：“cAMP 信号和 CREB/ATF”临床科学 30(3) (1994)。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Alberts,A.S.,et al.: "Recombinant cyclic AMP response element binding protein (CREB) phosphorylated on Ser-133 is transcriptionally active upon its introduction into fibroblast nuclei." J Biol Chem. 269. 7623-30 (1994)
Alberts, A.S. 等人：“在 Ser-133 上磷酸化的重组环 AMP 反应元件结合蛋白 (CREB) 在引入成纤维细胞核后具有转录活性。”
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Okada,H.,et al.: "Anti-(glioma surface antigen) monoclonal antibody G-22 recognizes overexpressed CD44 in glioma cells." Cancer Immunology Immunotherapy. 39. 313-317 (1994)
Okada, H., et al.：“抗（神经胶质瘤表面抗原）单克隆抗体 G-22 识别神经胶质瘤细胞中过度表达的 CD44。”
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Synthetic investigation of pathological phase separation of RNA-binding proteins
  • 批准号：
    21H05042
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research (S)
  • 资助金额：
    $121.14万
  • 财政年份：
    2021
  • 负责人：
    萩原 正敏
  • 依托单位：
    Kyoto University
トランスクリプトームの人為的操作による遺伝病の治療
  • 批准号：
    15H02505
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
  • 资助金额：
    $12.65万
  • 财政年份：
    2015
  • 负责人：
    萩原 正敏
  • 依托单位：
    Kyoto University
ヘルペスウイルスRNAの核外輸送制御機構の解明
  • 批准号：
    19041027
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 资助金额：
    $4.8万
  • 财政年份：
    2007
  • 负责人：
    萩原 正敏
  • 依托单位：
    Tokyo Medical and Dental University
ケミカルジェネティクスによる生体機能の解明
  • 批准号：
    18631008
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
  • 资助金额：
    $2.18万
  • 财政年份：
    2006
  • 负责人：
    萩原 正敏
  • 依托单位：
    Tokyo Medical and Dental University
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