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新規癌抑制タンパク質p110γによる細胞癌化抑制メカニズムの解明

阐明新型肿瘤抑制蛋白p110γ抑制细胞癌的机制

基本信息

批准号：
14028072
负责人：
佐々木雄彦
金额：
$ 4.67万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1,ヒト大腸癌由来培養細胞株HCT116,DLD-1での発現実験系において,野生型p110γの外来的な発現はコロニー形成能(増殖能)の低下,ヌードマウス皮下での腫瘍形成能の低下を引き起こした。2,P110γのN末端欠失変異体は細胞内で安定した発現を確認できなかった。3,p110γは3つの機能ドメイン,すなわち,Ras結合ドメイン,リン脂質との結合に関与するC2ドメイン,キナーゼドメインを有する。これらに加え,結晶構造解析により見いだされた特徴的なヘリカルドメインとN末端領域の5種類のp110γ部分断片の発現ベクターを構築し,それらの導入細胞にて,フォーカス形成能,コロニー形成能の評価を試みた。その結果,p110γのRas結合ドメイン(216-312aa)あるいはキナーゼドメイン(726-1092aa)のみの発現も,全長p110γ(1-1102aa)と同程度のコロニー形成能の低下を導いた。4,Rasとそのエフェクターとの結合をp110γが遮断することにより増殖抑制が導かれる可能性を検討した。結晶構造解析の結果から,Rasのefector domainとの結合に関与しているものと推測されるThr232,Lys251,Lys254,Lys255,Lys256への変異導入体(T232D/K251A/K254S/K255A/K256AおよびT232D/K251E/K254S/K255A/K256Aは,野生型と同レベルのPI3K活性を示すが,Rasと結合できない)は野生型p110γと同等の増殖抑制活性を示した。また,野生型p110γの発現はKi-ras欠損DLD-1細胞の軟寒天培地内でのコロニー形成をも抑制した。5,p110γのC末端からの欠失変異体の作用を検討した。その結果,C末端に存在するキナーゼドメインを欠く変異体は全て,増殖抑制活性を喪失した(この中にはRas結合ドメインを含むものが3種存在する)。一方で,キナーゼドメインへの点変異導入によるPI3K活性不活型p110γの発現は,野生型p110γ発現と同等の増殖抑制作用を示した。以上の結果から,p110γはキナーゼドメインを含むC末端領域を介して,しかしキナーゼ活性非依存的に,細胞増殖抑制および癌細胞形質の改善を導くことが明らかになった。

1. The expression of HCT116, DLD-1 in human colorectal cancer cell line was studied. The expression of exogenous p110 γ in human colorectal cancer cell line HCT116, DLD-1 was significantly lower than that in human colorectal cancer cell line HCT116. 2, P110 γ N-terminal deletion is confirmed to be stable in cells. 3, p110 γ 3 In addition, the crystal structure analysis of the five types of p110 γ partial fragments in the N-terminal region was carried out. As a result, p110 γ Ras binding region (216 - 312aa) is the main source of p110 γ Ras binding region (726 - 1092aa), and p110 γ (1 - 1102aa) is the main source of p110 γ Ras binding region (216 - 312aa). 4. To explore the possibility that Ras may be inhibited by the combination of p110 γ and p110 γ. The results of crystal structure analysis show that Ras efector domain is associated with Thr 232, Lys 251, Lys 254, Lys 255, Lys 256 and its variant introducer.(T232D/K251A/K254S/K255A/K256A and T232D/K251E/K254S/K255A/K256A), wild-type p110 γ and wild-type p110 γ showed similar proliferation inhibitory activity. In addition, the expression of wild-type p110 γ was inhibited by inhibition of the formation of p110 γ in Ki-ras-deficient DLD-1 cells in soft culture. 5, p110 γ C-terminal mutation and its role in gene mutation are discussed. As a result, the presence of Ras at the C-terminal region resulted in a loss of growth inhibition activity due to the lack of heterozygosity (including the presence of Ras at the C-terminal region). On the other hand, the expression of PI3K inactive p110 γ and the expression of wild-type p110 γ were shown to inhibit the proliferation of p110 γ. As a result, p110 γ was found to inhibit cell proliferation and improve the morphology of cancer cells in an activity-independent manner, mediated by the C-terminal domain.