造血幹細胞の増幅・維持の分子機構とその制御シグナル伝達分子

造血干细胞扩增维持的分子机制及其调控信号转导分子

• 批准号: 15039208
• 负责人: 高木 智
• 金额: $ 2.69万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15039208/
• 关键词: 造血幹細胞; アダプター蛋白質; シグナル伝達; 骨髄移植; 再生医療; 遺伝子導入; サイトカイン; サイトカイン受容体; 細胞増殖

1、造血幹細胞の増幅に関与するLnk依存性制御系の標的受容体及び標的遺伝子群の同定Lnk欠損マウス骨髄では、CD34-cKit+Sca1+Lin-細胞、Hoechst染色によって識別されるSP細胞が著しく増加するとともに機能的な骨髄造血幹細胞の顕著な増加が生じていることを示した。一部の造血幹細胞においては細胞あたりの造血系再構築能も亢進していることを個々の造血幹細胞の競合的骨髄再構築能を個別に検討することにより明らかにした。2、Lnkの機能阻害分子による造血幹細胞制御法の検討Lnk依存性制御機構をコントロールすることで造血幹細胞の造血能を向上させ骨髄移植に伴うリスクの軽減を目指して、Lnk阻害分子を開発しその効果を骨髄移植モデルを用いて検証した。Lnkの各部位にアミノ酸置換変異や欠失変異を導入して作製した種々のLnk変異体をc-Kit依存性に増殖する細胞株に発現させた。Lnkによる増殖抑制にはSH2ドメインが必須であり、LnkSH2変異体はドミナントネガティブ(DN)変異体として機能することがわかった。SH2変異に加えてPHドメイン欠損とC末端領域欠損を組み合わせると、より効果的に野生型Lnkの機能を阻害することがわかった。得られたDN-Lnk変異体をレトロウィルスベクターによりマウス造血前駆細胞に感染導入した後、放射線照射したマウスへ移植した。DN-Lnk変異体導入細胞を移植した群では、コントロール細胞移植群に比しGFP陽性血球細胞の割合が明らかに増加しており、DN-Lnk変異体を導入した前駆細胞の造血能亢進が観察された。さらに、DN-Lnk変異体のプラスミドDNAによる一過性発現によっても造血前駆細胞の生着能が亢進することがわかった。

1, hematopoietic stem cell の raised に masato and す る Lnk dependency suppression is の mark left by let body and び bid 伝 subgroup の with fixed Lnk owe loss マ ウ ス bone marrow で は, CD34 - cKit + Sca1 + Lin - cell, Hoechst staining に よ っ て recognition さ れ る が SP cells with し く raised plus す る と と も に function な bone marrow hematopoietic stem The cell 顕 writes な increases が student じて る る とを とを shows た. A の hematopoietic stem cells に お い て は cells あ た り の hematopoietic system can build again も hyperthyroidism し て い る こ と を a 々 の competition の hematopoietic stem cells of bone marrow can build individual に を again beg す 検 る こ と に よ り Ming ら か に し た. 2, Lnk の function resistance against molecular に よ る hematopoietic stem cell suppression method の beg Lnk 検 dependency system royal institution を コ ン ト ロ ー ル す る こ と で の hematopoietic hematopoietic stem cells can を upward さ せ に with bone marrow transplantation う リ ス ク の 軽 を reduction refers し て, Lnk resistance against molecular を 発 し そ の unseen fruit を モ bone marrow transplantation デ ル を with い て 検 card し た. Each part of the Lnk の に ア ミ ノ acid replacement - different や owe lost - different を import し て cropping し た kind 々 の Lnk - variant を c - Kit dependency に raised colonization す る cell lines に 発 now さ せ た. Inhibit Lnk に よ る raised colonization に は SH2 ド メ イ ン が must で あ り, LnkSH2 - variant は ド ミ ナ ン ト ネ ガ テ ィ ブ (DN) - variant と し て function す る こ と が わ か っ た. SH2 - different に plus え て PH ド メ イ ン owe loss と group C terminal areas owe loss を み close わ せ る と, よ り unseen fruited に wild-type Lnk の function を resistance against す る こ と が わ か っ た. Have ら れ た DN - Lnk - variant を レ ト ロ ウ ィ ル ス ベ ク タ ー に よ り マ ウ ス に 駆 before hematopoietic cells infected with import し た and adjuvant radiotherapy after し た マ ウ ス へ transplantation し た. DN - Lnk - import cells を transplanted allograft し た group で は, コ ン ト ロ ー ル に cell transplantation group than し GFP positive の cut blood cells or が Ming ら か に raised plus し て お り, DN - Lnk - variant を import し た before 駆 の hematopoietic cells can hyperthyroidism が 観 examine さ れ た. さ ら に, DN - Lnk - variant の プ ラ ス ミ ド DNA に よ る transient 発 now に よ っ て も の 駆 before hematopoietic cells can with が hyperthyroidism す る こ と が わ か っ た.

项目成果

Iseki, M.: "The negative regulatory role of APS, an adaptor molecule containing PH and SH2 domains, in B-1 cells and BCR-mediated proliferation."Mol.Cell.Biol.. (印刷中). (2004)

Iseki, M.：“APS（一种包含 PH 和 SH2 结构域的接头分子）在 B-1 细胞和 BCR 介导的增殖中的负调节作用。”Mol.Cell.Biol..（出版中）。

Increased Numbers of B-1 Cells and Enhanced Responses against TI-2 Antigen in Mice Lacking APS, an Adaptor Molecule Containing PH and SH2 Domains

缺乏 APS（一种含有 PH 和 SH2 结构域的衔接分子）的小鼠中 B-1 细胞数量增加并增强对 TI-2 抗原的反应

• 发表时间: 2004
• 期刊: Molecular and Cellular Biology 24・6
• 作者: Iseki;M.;Kubo;C.;Takatsu;K.;Takaki;S.et al.
• 通讯作者: S.et al.

Moon, B.G.: "Role of interleukin-5 in B-1 cell maturation for survival, homeostatic proliferation and differentiation into IgA-producing cells."J.Immunol.. (印刷中). (2004)

Moon, B.G.：“白细胞介素 5 在 B-1 细胞成熟、存活、稳态增殖和分化为 IgA 生成细胞中的作用。”J.Immunol..（出版中）。

Minami, A.: "Increased insulin sensitivity and hypoinsulinemia in APS knockout mice."Diabetes. 52. 2657-2665 (2003)

Minami, A.：“APS 基因敲除小鼠的胰岛素敏感性增加和低胰岛素血症。”糖尿病。

Roles of a conserved family of adaptor proteins, Lnk, SH2-B, and APS, for mast cell development, growth, and functions.

接头蛋白保守家族 Lnk、SH2-B 和 APS 在肥大细胞发育、生长和功能中的作用。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Biochem.Biophys.Res.Commun. 315・2
• 作者: Kubo-Akashi;C.
• 通讯作者: C.