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造血幹細胞の増幅・維持の分子機構とその制御シグナル伝達分子

造血干细胞扩增维持的分子机制及其调控信号转导分子

基本信息

批准号：
15039208
负责人：
高木智
金额：
$ 2.69万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

1、造血幹細胞の増幅に関与するLnk依存性制御系の標的受容体及び標的遺伝子群の同定Lnk欠損マウス骨髄では、CD34-cKit+Sca1+Lin-細胞、Hoechst染色によって識別されるSP細胞が著しく増加するとともに機能的な骨髄造血幹細胞の顕著な増加が生じていることを示した。一部の造血幹細胞においては細胞あたりの造血系再構築能も亢進していることを個々の造血幹細胞の競合的骨髄再構築能を個別に検討することにより明らかにした。2、Lnkの機能阻害分子による造血幹細胞制御法の検討Lnk依存性制御機構をコントロールすることで造血幹細胞の造血能を向上させ骨髄移植に伴うリスクの軽減を目指して、Lnk阻害分子を開発しその効果を骨髄移植モデルを用いて検証した。Lnkの各部位にアミノ酸置換変異や欠失変異を導入して作製した種々のLnk変異体をc-Kit依存性に増殖する細胞株に発現させた。Lnkによる増殖抑制にはSH2ドメインが必須であり、LnkSH2変異体はドミナントネガティブ(DN)変異体として機能することがわかった。SH2変異に加えてPHドメイン欠損とC末端領域欠損を組み合わせると、より効果的に野生型Lnkの機能を阻害することがわかった。得られたDN-Lnk変異体をレトロウィルスベクターによりマウス造血前駆細胞に感染導入した後、放射線照射したマウスへ移植した。DN-Lnk変異体導入細胞を移植した群では、コントロール細胞移植群に比しGFP陽性血球細胞の割合が明らかに増加しており、DN-Lnk変異体を導入した前駆細胞の造血能亢進が観察された。さらに、DN-Lnk変異体のプラスミドDNAによる一過性発現によっても造血前駆細胞の生着能が亢進することがわかった。

1. The amplitudes of hematopoietic cells were the same as those of the recipients and subgroups of the Lnk-dependent system. Lnk deficient bone marrow cells, CD34-cKit+Sca1+Lin- cells, Hoechst staining cells, SP cells, bone marrow hematopoietic cells, which have the ability to increase the function of bone marrow, were detected in the same way. A hematopoietic cell cycle is capable of promoting the fusion of two hematopoietic cells. 2. The Lnk machine can block the molecular hematopoietic cell system, the Lnk dependent control mechanism, the hematopoietic cell hematopoietic system, the hematopoietic stem cell, the hematopoietic cell, the hematopoietic In all parts of Lnk, it was found that there was no significant difference between the two parts of the plant, and the cell lines of Lnk-dependent colonies were detected by inoculation of c-Kit-dependent colonies. Lnk anti-colonization is necessary for SH2 colonization, and LnkSH2 is necessary for both physical and mechanical response. (DN) the mechanical properties of the host are affected. In the SH2 system, there is a lack of information in the field of the C-terminal in the field of the wild-type Lnk. The wild-type Lnk is able to prevent the growth of the virus. After the infection of pre-hematopoietic progenitor cells, radiation exposure was required to induce transplantation after the infection of DN-Lnk cells. The hematopoietic activity of DN-Lnk cells was higher than that of GFP cells, and the hematopoiesis of DN-Lnk cells was higher than that of PBCs. It was found that the progenitor cells of prehematopoietic progenitor cells were able to increase the activity of blood mononuclear cells (DNA) as soon as they were sexually active.