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造血幹細胞の増幅・維持の分子機構とその制御シグナル伝達分子

造血干细胞扩增维持的分子机制及其调控信号转导分子

基本信息

批准号：
15039208
负责人：
高木智
金额：
$ 2.69万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

1、造血幹細胞の増幅に関与するLnk依存性制御系の標的受容体及び標的遺伝子群の同定Lnk欠損マウス骨髄では、CD34-cKit+Sca1+Lin-細胞、Hoechst染色によって識別されるSP細胞が著しく増加するとともに機能的な骨髄造血幹細胞の顕著な増加が生じていることを示した。一部の造血幹細胞においては細胞あたりの造血系再構築能も亢進していることを個々の造血幹細胞の競合的骨髄再構築能を個別に検討することにより明らかにした。2、Lnkの機能阻害分子による造血幹細胞制御法の検討Lnk依存性制御機構をコントロールすることで造血幹細胞の造血能を向上させ骨髄移植に伴うリスクの軽減を目指して、Lnk阻害分子を開発しその効果を骨髄移植モデルを用いて検証した。Lnkの各部位にアミノ酸置換変異や欠失変異を導入して作製した種々のLnk変異体をc-Kit依存性に増殖する細胞株に発現させた。Lnkによる増殖抑制にはSH2ドメインが必須であり、LnkSH2変異体はドミナントネガティブ(DN)変異体として機能することがわかった。SH2変異に加えてPHドメイン欠損とC末端領域欠損を組み合わせると、より効果的に野生型Lnkの機能を阻害することがわかった。得られたDN-Lnk変異体をレトロウィルスベクターによりマウス造血前駆細胞に感染導入した後、放射線照射したマウスへ移植した。DN-Lnk変異体導入細胞を移植した群では、コントロール細胞移植群に比しGFP陽性血球細胞の割合が明らかに増加しており、DN-Lnk変異体を導入した前駆細胞の造血能亢進が観察された。さらに、DN-Lnk変異体のプラスミドDNAによる一過性発現によっても造血前駆細胞の生着能が亢進することがわかった。

1. The increase of hematopoietic stem cell amplitude related to Lnk-dependent control system, the increase of hematopoietic stem cell proliferation related to CD34-cKit+ Sca1 + Lin-cells, Hoechst staining, and the identification of SP cells. A part of hematopoietic stem cells can be reorganized into hematopoietic cells, and a part of hematopoietic stem cells can be reorganized into hematopoietic cells. 2. Lnk-dependent regulatory mechanisms for hematopoietic stem cell regulation are discussed in this paper. The aim of this paper is to provide guidance for the development of Lnk-inhibiting molecules in bone marrow transplantation. Lnk cell lines were developed by introducing different acid substitutions into different parts of Lnk cells to control c-Kit-dependent propagation of Lnk mutants. LnkSH2 is a must for growth inhibition. LnkSH2 is a variant of DN. SH2 is different from PH and C-terminal. After the introduction of hematopoietic cells, radiation irradiation was carried out. The increase of hematopoietic function of DN-Lnk allogeneic cells prior to transplantation was observed in comparison with the increase of GFP-positive cells in DN-Lnk allogeneic cells. In addition, DN-Lnk can be used for transient expression of DNA in hematopoietic progenitor cells.