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チロシンリン酸化を介する細胞形態・接着制御機構の解析

酪氨酸磷酸化介导的细胞形态及粘附控制机制分析

基本信息

批准号：
08670170
负责人：
浜口道成
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)がん遺伝子産物の酵素活性として発見されたチロシンキナーゼは、癌化のみならず正常細胞の増殖・分化^<論文1)>、免疫応答^<4-6)>、血小板凝集等多様な生命現象に係わりつつある事が明らかになりつつある。しかしこれら諸現象を制御する生化学的実態は十分解明されていない。我々は、v-Srcキナーゼが細胞の形態・接着を劇的に変化させることに注目し、種々のv-Src変異株と高品位の抗ホスフォチロシン抗体を用いて、細胞形態・接着を制御するチロシンリン酸化蛋白質の解析をすすめてきた。本研究は、チロシンリン酸化を介する細胞の形態・接着の制御機構を生化学的に解明する事にある。実際には、細胞の形態・接着を維持する主要な細胞構造3種の機能制御とc-Srcキナーゼの新規活性化機構にしぼり実験を行った。その結果、(1)重金属、NO等による酸化・還元反応によって、Srcキナーゼが活性化される事を見い出した。さらに、この酸化・還元による活性化はSrcキナーゼのシステイン残基が標的となっている事を示す結果を得た。そこで、Srcキナーゼのシステイン残基10個の各々に点突然変異を導入しつつある。システイン残基の6番から9番については各々システインをアラニンに点突然変異する作業が完了し、そのキナーゼ活性に対する影響を検討しつつある。その結果、8、9番の2重の変異にて、キナーゼ活性が抑制を受ける事を示唆する結果を得た。(2)domonant negative ras(S17Nras)遺伝子を用いてカドヘリン依存性細胞間接着の制御機構を解析した結果,SrcキナーゼのシグナルはRasを介して伝達し、細胞接着の抑制を生じる事を明らかにした。(3)v-SrcキナーゼによるマトリックスメタロプロテイナーゼMMP-2の活性化機構を、同様にS17Nrasを用いて解析した結果、この活性化もRasを介する事を明らかにした。

(1)The enzyme activity and development of gene products are related to a variety of biological phenomena, such as proliferation and differentiation of normal cells, carcinogenesis, immune response, and platelet aggregation. The biochemical state of control of these phenomena is well understood. We are looking forward to seeing you in the future. The present study is aimed at elucidating cellular morphology, subsequent regulatory mechanisms and biochemical processes involved in the regulation of cellular acidification. In fact, the cell morphology and subsequent maintenance of the three main cell structure of the functional control and c-Src, the new activation mechanism of the implementation The results are as follows: (1) Heavy metals, NO, etc., acidification, reduction, oxidation, Src, etc. The activity of the enzyme is determined by the reaction time of the enzyme. All 10 of the 10 residues were changed abruptly. The effect of sudden change in the activity of six or nine residues of a protein on the activity of a protein is discussed. The results of the 8-and 9-fold changes in activity and inhibition were obtained. (2)domonant negative ras(S17Nras) gene expression in the middle of the analysis results of the dependent intercellular adhesion control mechanism,Src (3) The activation mechanism of MMP-2 and S17Nras were analyzed in detail.