プロテオームによるアルツハイマー病の病態解析法の開発

利用蛋白质组开发阿尔茨海默病病理分析方法

• 批准号: 13204047
• 负责人: 下濱 俊
• 金额: $ 3.84万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13204047/
• 关键词: 脳神経疾患; アルツハイマー病; 痴呆; プロテオーム; 蛋白質; 二次元電気泳動; プロテオミクス

孤発例を主体とするアルツハイマー病では、生成されたタンパクを網羅的に検討し、その翻訳後修飾やタンパク相互作用を明らかにしてゆくことが重要である。ヒト脳においてはこのようなタンパクの多くはリン酸化や糖鎖付加などの翻訳後修飾をうけており、その変化がアルツハイマー病のプロテオーム変動に深く関わっている可能性がある。今回は、タンパクプロファイルの詳細を検討する目的で、脳タンパクをその分画ごとにプロテオーム解析(subproteomics)した。その結果、(1)脳の親水性タンパクについては、約800スポットをデータベース化し、主として質量分析装置を用いた同定を可能にした。疎水性タンパクについては独自に開発した可溶化条件で安定したプロファイリングが可能になり、約200のスポットをデータベース化したが親水性タンパクに比べ変動が大きかった。(2)正常対照群とアルツハイマー病群で脳タンパクの発現を比較し、親水性タンパク、疎水性タンパクとも有意に変動するスポットを確認した。(3)親水性脳タンパクの糖鎖付加を検討した。アルツハイマー病に特異的な変動は認めなかった。高分子量タンパクのプロファイリングが困難で、その理由として、IPGゲルの特性、可溶化過程での分解などが考えられた。また、塩基性タンパクのプロファイリングも困難で、その理由として、電気的浸透により、泳動結果に大きなゆがみや欠失を生じることが考えられた。抗リン酸化タンパク抗体を用いた方法ではスポットを確実に特定できなかった。今後、(1)アルツハイマー病で変化を示した微量タンパクの同定、(2)膜タンパクの分離及びタンパクのリン酸化の検出には、さらに方法論的にいくつかの試行錯誤が必要である。(3)今回行ったスポットごとの群間比較のみでなく、タンパクネットワーク中でのアルツハイマー病での変化を抽出する解析が必要である。

Solitary 発 example を subject と す る ア ル ツ ハ イ マ ー disease で は, generate さ れ た タ ン パ ク を snare of に beg し 検, そ の modification after turn 訳 や タ ン パ ク interaction を Ming ら か に し て ゆ く こ と が important で あ る. ヒ ト 脳 に お い て は こ の よ う な タ ン パ ク の more く は リ ン acidification や sugar plus lock な ど の modification after turn 訳 を う け て お り, そ の variations change が ア ル ツ ハ イ マ ー disease の プ ロ テ オ ー ム - move に deep く masato わ っ て い る possibility が あ る. This は, タ ン パ ク プ ロ フ ァ イ ル の detailed を beg す 検 る purpose で, 脳 タ ン パ ク を そ の points draw ご と に プ ロ テ オ ー ム parsing (subproteomics) し た. そ の results, (1) 脳 の hydrophilic タ ン パ ク に つ い て は, about 800 ス ポ ッ ト を デ ー タ ベ ー ス し, Lord と し て を quality analysis device with い た be を may に し た. 疎 water-based タ ン パ ク に つ い て は に alone open 発 し た で solubilization conditions stable し た プ ロ フ ァ イ リ ン グ が may に な り, about 200 の ス ポ ッ ト を デ ー タ ベ ー ス change し た が hydrophilic タ ン パ ク に than べ - moved が big き か っ た. (2) according to the group of seaborne normal と ア ル ツ ハ イ マ ー disease group で 脳 タ ン パ ク の 発 now を し and hydrophilic タ ン パ ク, water-based 疎 タ ン パ ク と も intentionally に - move す る ス ポ ッ ト を confirm し た. (3) Hydrophilic 脳タ パ パ <s:1> sugar locking plus を検 sugar た. Youdaoplaceholder0 ア ハ ハ ハ ハ ハ ア ア the に specific な variation ハ recognition めな った った った. High molecular weight タ ン パ ク の プ ロ フ ァ イ リ ン グ が difficulties で, そ の reason と し て, interpublic ゲ ル の properties, the solubilization process で の decomposition な ど が exam え ら れ た. ま た, salt base タ ン パ ク の プ ロ フ ァ イ リ ン グ も difficulties で, そ の reason と し て drenched, electricity 気 に よ り, large swimming results に き な ゆ が み や owe lost を raw じ る こ と が exam え ら れ た. Resistance リ ン acidification タ ン パ を ク antibody with い た method で は ス ポ ッ ト を indeed be に specific で き な か っ た. In the future, (1) ア ル ツ ハ イ マ で ー disease - the を shown し た trace タ ン パ ク の with, (2) membrane タ ン パ ク の separation and び タ ン パ ク の リ ン acidification の 検 out に は, さ ら に methodology に い く つ か の pilot error が necessary で あ る. (3) this return っ た ス ポ ッ ト ご と の group comparison between の み で な く, タ ン パ ク ネ ッ ト ワ ー ク in で の ア ル ツ ハ イ マ ー disease で の variations change を spare す る parsing が necessary で あ る.

项目成果

下濱 俊: "プロテオミクスを手法としたアルツハイマー病の病態解析"医学のあゆみ. 196. 426-427 (2001)

Shun Shimohama：“利用蛋白质组学对阿尔茨海默病进行病理学分析”医学史 196. 426-427 (2001)。

Tsuji T et al.: "Analysis of the proteomic profiling of brain tissue in Alzheimer's disease"Disease Markers. 17. 247-257 (2001)

Tsuji T 等人：“阿尔茨海默病脑组织的蛋白质组学分析”疾病标记。

Oeda T et al.: "Oxidative stress causes abnormal accumulation of familial anyotrophic lateral sclerosis -related mutant S001 in trangenic C. elegans"Human Molecular Genetics. 10. 2013-2023 (2001)

Oeda T 等人：“氧化应激导致转基因秀丽隐杆线虫中家族性肌营养不良侧索硬化症相关突变体 S001 的异常积累”人类分子遗传学。

Kihara T et al.: "Alpha 7 nirotinic receptor transduces signals to P13 kinase to block a Aβ-induced neurotoxicity"Journal of Biological Chemistry. 276. 13541-13546 (2001)

Kihara T 等人：“α 7 烟碱受体将信号转导至 P13 激酶以阻断 Aβ 诱导的神经毒性”《生物化学杂志》276. 13541-13546 (2001)。

Shimohama S et al.: "Differential expression of rat brain caspose family proteins durey development and aging"Biochem Biophys Res Commun. 289. 1063-1066 (2001)

Shimohama S 等人：“大鼠脑 caspose 家族蛋白 durey 发育和衰老的差异表达”Biochem Biophys Res Commun。