プロテオームによるアルツハイマー病の病態解析法の開発

利用蛋白质组开发阿尔茨海默病病理分析方法

• 批准号: 14013034
• 负责人: 下濱 俊
• 金额: $ 4.16万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14013034/
• 关键词: アルツハイマー病; 神経変性疾患; プロテオーム; 蛋白質; プロテオミクス; 二次元電気泳動; 質量分析; プレセニリン

(1)ヒト脳の親水性タンパクについては、約800スポットをデータベース化し、主として質量分析装置を用いた同定を可能にした。疎水性タンパクについては独自に開発した可溶化条件で安定したプロファイリングが可能になり、約200のスポットをデータベース化したが親水性タンパクに比べ変動が大きかった。(2)正常対照群とアルツハイマー病群で脳タンパクの発現を比較し、親水性タンパク、疎水性タンパクとも有意に変動するスポットを確認し、質量分析法により同定している。(3)親水性脳タンパクの糖鎖付加を検討した。アルツハイマー病に特異的な変動は認めなかったが、さらに詳細な検討が必要である。(4)ヒト脳神経細胞・株(SHY-5Y)に家族性AD原因遺伝子産物であるpresenilin 1(PS1)遺伝子を組み込んだ系を確立した。課題として、(1)アルツハイマー病で変化を示した微量タンパクの同定、(2)膜タンパクの分離及びタンパクのリン酸化の検出には、さらに方法論的にいくつかの試行錯誤が必要である。(3)上記研究で行ったスポットごとの群間比較のみでなく、全体のタンパクネットワークの中でのアルツハイマー病での変化を抽出する解析が必要である。現在、ヒト正常脳タンパク質のプロテオームデータベースとして、水溶性タンパク質、疎水性タンパク質の分画ごとにタンパク質のプロファイリングは整備され、AD脳での変動タンパク質を同定する作業に取りかかり、一部はすでに終了した。また、神経系細胞(SH-SY5Y細胞)にAD関連PS1遺伝子の野生型および変異型をstableに発現させる系を確立し、PS1遺伝子により影響を受ける細胞内タンパク質の変動を網羅的に明らかにし、同定する準備が整った。

(1)About 800 percent of the samples were hydrophilic, and the quality of the samples was stable. The solubility conditions of the water soluble agent are stable, and the solubility conditions of the water soluble agent are stable. The solubility conditions of the water soluble agent are stable, and the solubility conditions of the water soluble agent are stable, and the solubility conditions of the water soluble agent are stable, and the solubility conditions of the water soluble agent are stable, and the solubility conditions of the water soluble agent are stable. (2)Normal contrast group, disease group (3)Hydrophilicity of the sugar chain is discussed.アルツハイマー病に特异的な変动は认めなかったが、さらに详细な検讨が必要である。(4)The genetic family of the familial AD causal gene product presenilin 1(PS1) gene of the Neuro Neuron strain (SHY-5Y) has been established. The problems include: (1) identification of trace amounts of impurities,(2) detection of membrane impurities and their acidification, and (3) methodological errors. (3)In this paper, the analysis of inter-group comparison is necessary. At present, the operation of the normal solvent, the water soluble solvent, the water soluble solvent, The wild type and variant of AD-associated PS1 gene were identified and stable in neuro-lineage cells (SH-SY5Y cells). The system was established and PS1 gene was affected by the changes in intracellular quality.

项目成果

Kitagawa N et al.: "The role of the presenilin-1 homologue gene sel-12 of Caenorhabditis elegans in apoptotic activities"Journal of Biological Chemistry. (in press). (2003)

Kitakawa N等人：“秀丽隐杆线虫早老素1同源基因sel-12在细胞凋亡活性中的作用”生物化学杂志。

Wataya T et al.: "High molecular weight neurofilament proteins are physiological substrates of adduction by the lipid peroxidation product hydroxynonenal"Journal of Biological Chemistry. 277(7). 4644-4648 (2002)

Wataya T 等人：“高分子量神经丝蛋白是脂质过氧化产物羟基壬烯醛加合的生理底物”《生物化学杂志》。

Tsuji T et al.: "Proteomic profiling and neurodegeneration in Alzheimer's disease"Neurochem Res. 27(10). 1245-1253 (2002)

Tsuji T 等人：“阿尔茨海默氏病的蛋白质组分析和神经变性”Neurochem Res。

Takata K et al.: "Role of high mobility group protein-1 (HMG-1) in amyloid-beta homeostasis"Biochemi.Biophys.Res.Commun. 301(3). 699-703 (2003)

Takata K 等人：“高迁移率族蛋白 1 (HMG-1) 在淀粉样β稳态中的作用”Biochemi.Biophys.Res.Commun。

Kakimura JI et al.: "Microglial activation and amyloid-beta clearance induced by exogenous heat-shock proteins"FASEB J.. 16(6). 601-603 (2002)

Kakimura JI 等人：“外源热休克蛋白诱导的小胶质细胞活化和淀粉样蛋白清除”FASEB J.. 16(6)。