リンパ球に発現する新しいセリン・スレオニンキナーゼの遺伝子とシグナル伝達系の解析

淋巴细胞表达的新型丝氨酸/苏氨酸激酶基因及信号转导系统分析

• 批准号: 09877072
• 负责人: 烏山 一
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877072/
• 关键词: LOK; セリン・スレオニンキナーゼ; STE20ファミリー; リンパ球; ES細胞; ノックアウトマウス; 細胞接着; two hybrid法; シグナル伝達; MAPキナーゼ; アポトーシス; caspase-3

最近我々がリンパ球から単離した新規遺伝子LOKは酵母のMAPキナーゼカスケードにおいて重要な働きをしているSTE20と相同性をもつ新しいセリン・スレオニンキナーゼをコードしている。その発現がリンパ球系に強く認められることから、LOKは主に免疫系で機能していることが示唆された。そこでLOKの生体内での役割を明らかにするために、LOKノックアウトマウスの作製・解析をおこなった。まず、129マウス由来のゲノムライブラリーから第1エクソンを含むLOK遺伝子断片をクローングした。これをもとにNeoおよびTK遺伝子を挿入したターゲティングベクターを作製し、ES細胞に導入して相同組換えをおこしたESクローンを選別した。選別したESクローンを用いてキメラマウスを作製し、さらに交配を重ねることによりLOK遺伝子欠損のホモマウスを樹立した。できたLOKノックアウトマウスは外見上著変を認めず、リンパ球の分化に関しても正常マウスとの差異は認められなかった。ところが、リンパ球をマイトジェンで刺激したところ、形成されるリンパ球の凝集塊が正常マウスのリンパ球に比べ有意に大きいことが判明した。接着分子の解析からLFA-1を介する細胞接着が亢進しているが明らかとなり、LOKが細胞骨格・接着分子の機能制御に深く関わっていることが示唆された。一方、酵母を用いたtwo hybrid法により、LOKと会合しうる分子をコードするいくつかの遺伝子断片が単離された。現在、細胞内でのLOKとの会合の有無を解析中である。ヒトのLOK遺伝子を単離したところ、キナーゼドメインとcoi1ed-coil領域でマウス遺伝子と極めて高い相同性(93-98%)が認められた。ヒトLOK遺伝子は染色体5q35.1に、マウスLOK遺伝子は染色体11A4にマッピングされた。

Recently, I have changed my mind and changed my mind. LOK has changed my mind and changed my mind. It's the first time I've ever seen a person who's been in the immune system. LOK's biological activity is analyzed. 129. The origin of the virus is the first time that the virus has been detected, including LOK fragments. This is the first time that Neo and TK genes have been introduced into ES cells and the same components have been introduced into ES cells. Select the appropriate language for your application. The difference between them is that they are different. The results of the study showed that the concentration of the protein was higher than the concentration of the protein. The analysis of the next molecule is mediated by LFA-1, and the next step is to increase the activity of the cell. LOK is the function of the cell skeleton. One side, yeast, two hybrid method, LOK, rendezvous, molecule, fragment, fragment Now, the LOK in the cell is resolved. Lok-coil domain has a high identity (93-98%). The LOK gene is on chromosome 5q35.1 and on chromosome 11A4.

项目成果

Karasuyama,H.et al.: "LOK is a novel mouse STE20-like protein kinase that is expressed predominantly in lymphocytes." J.Biol.Chem.272. 22679-22684 (1997)

Karasuyama, H. 等人：“LOK 是一种新型小鼠 STE20 样蛋白激酶，主要在淋巴细胞中表达。”

Kuramochi, S.et al.: "The roles of preB cell receptor in early B cell development and its signal transduction." Immunol.Cell Biol.75. 209-216 (1997)

Kuramochi, S.et al.：“前 B 细胞受体在早期 B 细胞发育及其信号转导中的作用。”

Kuramochi,S.: "Molecular cloning of the human gene STK10 encoding lymphocyte-oriented kinase and comparative chromosomal mapping of the human,mouse and rat homologues." Immunogenetics.

Kuramochi,S.：“编码淋巴细胞导向激酶的人类基因 STK10 的分子克隆以及人类、小鼠和大鼠同源物的比较染色体作图。”

Kuramochi,S.et al.: ""LOK,a novel mouse STE20-like protein kinase that is expressed predominantly in lymphocytes."In Kinases and Phosphatases in Lymphocyte and Neuronal Signaling." Splinger,Tokyo, 354 (1997)

Kuramochi,S.等人：“LOK，一种新型小鼠 STE20 样蛋白激酶，主要在淋巴细胞中表达。”在淋巴细胞和神经元信号传导中的激酶和磷酸酶中。

烏山 一: "B細胞分化におけるプレB細胞レセプターシグナルの役割" 蛋白質核酸酵素. 43. 111-118 (1998)

Kazuyama Karasuyama：“前 B 细胞受体信号在 B 细胞分化中的作用”蛋白质核酸酶。 43. 111-118 (1998)