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新規シグナル分子単離を目指した遺伝学的スクリーニング法の開発

新規シグナル分子単離を目指した遺伝学的スクリーニング法の開発
开发用于分离新信号分子的遗传筛选方法
批准号：
15659118
负责人：
黒崎 知博
金额：
$1.79万
依托单位：
Kansai Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
2003 至 --
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659118/
关键词：
劣性遺伝子DT40変異アッセイ系GFP遺伝子ノックイン

项目摘要

项目成果

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哺乳類細胞の場合、劣性遺伝子を単離したい時、多くの遺伝子がdiploidで存在することが障害になる。このため、既にchickenDT40細胞において、chromosomeのcetromere,telemere周辺の遺伝子配列は決定されているので、相同組換えを利用してある特定のchromosome(chickenには5本存在する)の長腕、短腕を特異的にdeletionすることが可能である。既にこの方法を用いてchickenに存在するchromosomeの1、2、3のdeletion作成した。次にchromosome dessectionにより、1、2、3のchromosomeのgenomic bank (約20-50kb/clone)をつくり、その際in vitroで化学変異源を用いそれぞれのgenomic cloneに変異をいれると同時に哺乳類薬剤markerであるneo遺伝子を導入した。一方、DT40細胞のアッセイ系をGFPで光学的に容易に検出できるようシステムを構築した。Bcl-2遺伝子は、NF-KB径路により強く制御されているので、Bcl-2遺伝子プロモーター領域にGFP遺伝子をノックインの方法を用いて導入した。実際、NF-KB径路を活性化するシグナルをこの細胞に加えるとGFPの顕著な上昇が認められ、システムとして用いることができることを判明した。又、このBcl-2/GFPを導入したDT40細胞を用いて、変異を導入し、かつneo遺伝子を導入したgenomic bankをトランスフェクションして約1000個のクローンを得た。
期刊论文(4)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
Kurosaki, T.: "Checks and balances on developing B cells."Nat.Immunol.. 4. 13-15 (2003)
Kurosaki, T.：“检查和平衡发育中的 B 细胞。”Nat.Immunol.. 4. 13-15 (2003)
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Yamazaki, T., Kurosaki, T.: "Contribution of BCAP to maintenance of mature B cells through c-Rel."Nat.Immunol.. 4. 780-786 (2003)
Yamazaki, T., Kurosaki, T.：“BCAP 通过 c-Rel 对成熟 B 细胞维持的贡献”Nat.Immunol.. 4. 780-786 (2003)
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
長期液性免疫記憶を支える骨髄nicheの構築とその制御
  • 批准号：
    22H00450
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
  • 资助金额：
    $27.46万
  • 财政年份：
    2022
  • 负责人：
    黒崎 知博
  • 依托单位：
    Osaka University
Ｂ細胞の選択と生存におけるオートファジーの役割
  • 批准号：
    15F15908
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
  • 资助金额：
    $1.47万
  • 财政年份：
    2015
  • 负责人：
    黒崎 知博
  • 依托单位：
    Osaka University
液性免疫記憶の構築機序
  • 批准号：
    21249034
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
  • 资助金额：
    $13.06万
  • 财政年份：
    2009
  • 负责人：
    黒崎 知博
  • 依托单位：
    Osaka University
機能的劣性遺伝子単離の新規方法論の開発
海外基金