機能的劣性遺伝子単離を目指した新規スクリーニング法の開発

开发旨在分离功能性隐性基因的新筛选方法

• 批准号: 14657083
• 负责人: 黒崎 知博
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Kansai Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657083/
• 关键词: DT40; 相同組み換え; 劣性遺伝子; スクリーニング法

哺乳類細胞の場合、劣性遺伝子を単離したい時、多くの遺伝子がdiploidで存在することが障害になる。このため、既にchicken chromosomeのcetromere,telomere周辺の遺伝子配列は決定されているので、相同組換えを利用してある特定のchromosome(chickenには5本存在する)の長腕、短腕を、特異的にdeletionすることが可能である。従って先ず、この方法を用いて部分的haploid DT40 B細胞を作成することを試みた。chicken常染色体は5本からなっており、その4番染色体と5番染色体は種々の遺伝子座位が詳細に決定されている。従ってこの染色体をモデルにcentromere,telomere近傍の遺伝子座位を組替え領域に用いて大きな遺伝子deletion targeting vectorを構築した。Targeting vectorをDT40細胞にtransfectionして、targettingが生じたかをSouthern blottingにより検定した。4番、5番とも短腕のdeletionは比較的容易に単離することができたが、いずれも長腕の場合は頻度は低かった。このことは、長腕の場合はdeletionする領域が長いため、又は、クロマチン等構造的に相同組換えを生じる酵素系がaccessしづらいためではないかと考えられる。

Mammalian cells are damaged by the presence of a large number of defective genes. The same group of chromosomes (chicken chromosome) may be used to determine the long arm, short arm and specific deletion of the chromosome(chicken chromosome). This method was developed using some haploid DT40 B cells. chicken autosome 5, chromosome 4, chromosome 5, chromosome 6, chromosome 7, chromosome 8, chromosome 9, chromosome 9 A chromosome deletion targeting vector is constructed near a chromosome deletion locus. Targeting vector: cell transfection, targeting, Southern blotting 4, 5, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 10, 11, 10, 12, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 10 In the case of a long wrist, the deletion of the domain is the same as that of the structure of the enzyme system.

项目成果

Kurosaki, T.: "Regulation of B cell fates by BCR signaling components"Curr. Opin. Immunol.. 14. 341-347 (2002)

Kurosaki, T.：“BCR 信号成分调节 B 细胞命运”Curr。

Kurosaki, T.: "Regulation of B-cell signal transduction by adaptor proteins"Nature Rev. Immunol.. 2. 354-363 (2002)

Kurosaki，T.：“衔接蛋白对 B 细胞信号转导的调节”Nature Rev.Immunol.. 2. 354-363 (2002)

Kurosaki, T.: "Checks and balances on developing B cells"Nature Immunol.. 4. 13-15 (2003)

Kurosaki, T.：“检查和平衡发育中的 B 细胞”《自然免疫学》4. 13-15 (2003)