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機能的劣性遺伝子単離の新規方法論の開発

开发功能性隐性基因分离的新方法

基本信息

批准号：
19659124
负责人：
黒崎知博
金额：
$ 2.11万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19659124/
关键词：
劣勢遺伝子 DT40 Cre tamoxifen flox

项目摘要

哺乳類細胞の場合、劣性遺伝子を単離したい時、多くの遺伝子がdiploidで存在することが障害になる。このことが、新規シグナル分子の単離を拒んでいる大きな原因の一つである。そこで、私たちは相同組み換えの頻度が非常に高いchikenDT40細胞の特性を最大限用いて、劣性遺伝子の単離を試みている。先ず、その第一歩としてDT40細胞の部分的haploid細胞の樹立を試みている。この目的のため、既に、chickenDT40細胞において、chromosomeのcentromere,telemere周辺の遺伝子配列は決定されているので、相同組換えを利用して、ある特定のchromosome(chickenには5本存在する)の長腕、短腕を特異的にdeletionすることが可能になる。しかしながらhaploid遺伝子の場合、目的とする遺伝子が細胞の生存に必須である場合、この遺伝子の単離は困難を極めることになる。従って本年は、この生存に必須の遺伝子群単離を目的としてtamoxifen存在下で遺伝子をdeletionできるよう、Cre-ER融合遺伝子を発現させたDT40細胞を樹立した。Cre-ERを発現した細胞では、flox siteを導入した遺伝子がtamoxifen存在下で初めてdeletionされ、この方法が有効であることを確認した。又、細胞生存を増強すると考えられている遺伝子Bc12をDT40細胞に強制発現することにより、たとえ特定の遺伝子が生存に必須であってもrescue可能なような細胞を樹立した。

Mammalian cells are damaged by the presence of a large number of defective genes. The reason for this is that the new rules are not applicable to the molecular separation. The frequency of the same group of cells is very high. The characteristics of chikenDT40 cells are limited to the maximum use, and the characteristics of poor cells are isolated. The first step is to establish some haploid cells in DT40 cells. The purpose of this study is to determine the deletion of chromosome, chromosome and telemere in chickenDT40 cells, and to determine the deletion of chromosome, chromosome and telemere in chicken cells. The situation, purpose and difficulty of haploid gene in cell survival This year, the essential gene for survival was deleted and the Cre-ER fusion gene was developed in the presence of tamoxifen. Cre-ER is found in cells, flox sites are introduced, and tamoxifen is present. In addition, cell survival is enhanced by the presence of Bc12 and DT40 cells under stress, and specific genes are required to survive.