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劣性遺伝子単離の迅速スクリーニング法の開発

劣性遺伝子単離の迅速スクリーニング法の開発
隐性基因分离快速筛选方法的开发
批准号：
16659128
负责人：
黒崎 知博
金额：
$2.24万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
2004 至 --
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659128/
关键词：
劣性遺伝子DT40変異アッセイ系GFP遺伝子ノックイン

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哺乳類細胞の場合、劣性遺伝子を単離したい時、多くの遺伝子がdiploidで存在することが障害になる。このため、既にchickenDT40細胞において、chromosomeのcetromere, telemere周辺の遺伝子配列は決定されているので、相同組換えを利用して、ある特定のchrosome (chickenには5本存在する)の長腕、短腕を特異的にdeletionすることが可能である。既にこの方法を用いてchickenに存在するchromosomeの1,4,5のdeletion作成した。次にchromosomedissectionにより、1,4,5のchromosomeのgenomic bank(約20-50kb/clone)をつくり、その際in vitroで化学変異源を用い、それぞれのgenomic cloneに変異をいれると同時に哺乳類薬剤markerであるneo遺伝子を導入した。この劣性機能的遺伝子単離の実験検定系として、NF-κB径路を用いた。BCl-2遺伝子は、NF-κB径路により制御されている典型的な遺伝子である。BCl-2遺伝子の発現状態を簡便に検定できるよう、この遺伝子プロモーター領域にGFP遺伝子をノックインし、細胞を樹立した。その結果、GFPの上昇が見られない(すなわち、NF-κB径路の変異が生じている)変異クローン単離に成功し、これらのクローンが非特異的な変異によって生じているわけではないことを確認した。このことは、この実績モデルが有効な、劣性遺伝子単離の方法になり得ることを示している。
期刊论文(6)
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会议论文
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DOI： --
发表时间： 2004
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  • 批准号：
    22H00450
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
  • 资助金额：
    $27.46万
  • 财政年份：
    2022
  • 负责人：
    黒崎 知博
  • 依托单位：
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  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
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  • 财政年份：
    2009
  • 负责人：
    黒崎 知博
  • 依托单位：
    Osaka University
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海外基金