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劣性遺伝子単離の迅速スクリーニング法の開発

隐性基因分离快速筛选方法的开发

基本信息

批准号：
16659128
负责人：
黒崎知博
金额：
$ 2.24万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659128/
关键词：
劣性遺伝子 DT40 変異アッセイ系 GFP遺伝子ノックイン

项目摘要

哺乳類細胞の場合、劣性遺伝子を単離したい時、多くの遺伝子がdiploidで存在することが障害になる。このため、既にchickenDT40細胞において、chromosomeのcetromere, telemere周辺の遺伝子配列は決定されているので、相同組換えを利用して、ある特定のchrosome (chickenには5本存在する)の長腕、短腕を特異的にdeletionすることが可能である。既にこの方法を用いてchickenに存在するchromosomeの1,4,5のdeletion作成した。次にchromosomedissectionにより、1,4,5のchromosomeのgenomic bank(約20-50kb/clone)をつくり、その際in vitroで化学変異源を用い、それぞれのgenomic cloneに変異をいれると同時に哺乳類薬剤markerであるneo遺伝子を導入した。この劣性機能的遺伝子単離の実験検定系として、NF-κB径路を用いた。BCl-2遺伝子は、NF-κB径路により制御されている典型的な遺伝子である。BCl-2遺伝子の発現状態を簡便に検定できるよう、この遺伝子プロモーター領域にGFP遺伝子をノックインし、細胞を樹立した。その結果、GFPの上昇が見られない(すなわち、NF-κB径路の変異が生じている)変異クローン単離に成功し、これらのクローンが非特異的な変異によって生じているわけではないことを確認した。このことは、この実績モデルが有効な、劣性遺伝子単離の方法になり得ることを示している。

Mammalian cells are damaged by the presence of a large number of defective genes. This is the case with chickenDT40 cells, chromosome and chromosome, and telemere. The same group of chromosome can be used, and specific chromosomes (chicken) can be used. This method is based on the deletion of chromosome 1, 4 and 5 in chicken. The genome bank(about 20-50kb/clone) of chromosome is divided into three parts: chromosomedissection, chromosome 1, chromosome 4, chromosome 5, chromosome 6, chromosome 7, chromosome 8, chromosome 9, chromosome 9, The function of this gene is to determine whether the NF-κB pathway is used. BCl-2 gene and NF-κB pathway are typical genes. The expression status of BCl-2 gene can be easily determined. The expression status of BCl-2 gene can be easily determined. The expression status of BCl-2 gene can be easily determined. The expression status of GFP gene can be easily determined. The expression status of BCl-2 gene can be easily determined. As a result, GFP rise was identified as a result of differences in the NF-κB pathway. This is the first time that we've had a chance to do this, and we've had a chance to do this.