内向き整流性ポタシウムチャネルの構造機能連関の分子生物学的解析

内向整流钾通道结构与功能关系的分子生物学分析

• 批准号: 06780696
• 负责人: 久保 義弘
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Institute for Neuroscience
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780696/
• 关键词: 内向き整流性K^+チャネル; cDNA; ZRK1; ミューテーション; 細胞外K^+

我々は強い内向き整流性を示すK^+チャネルのcDNA,ZRK1をはじめて単離した。今年度ZRK1を用いて、その機能解析を以下のように行った。内向き整流性K^+チャネルのゲート,もしくは内向き整流性を決定しているのが、K^+の平衡電位からのずれであるのか、細胞外K^+濃度と膜電位のコンビネーションなのかについては、未だ決着がついていないので、最初にこの点を解析した。培養293細胞にZRK1をtrnasjectl・stableに発現する株を作成し、細胞外、内、のK^+濃度をかえる実験を行った。その結果、K^+の平衡電位からのシフトではなく、細胞外K^+濃度と膜電位のコンビネーションを感知していることがわかった。次に、細胞外K^+濃度を感知する機構を知るために、まず細胞外K^+の結合部位の同定を試みた。すなわち、このチャネルのポアの細胞外によっていると考えられる部分に種々のmntationを導入し、解析した。その結果、mutantのひとつは、活性化の的定数がきわめておそく(大きく)なったので、この部位が、細胞外K^+の相互作用部位と考えられた。さらに、このmutantは、過分極をつよくしていくと、コンダクタンスが上昇しつづけ、-200mV付近までは飽和しないという特長を示した。今後、このmutantの解析を促進、発展させる予定である。

I 々 々 strong <s:1> inward <s:1> rectifying を shows すK^+チャネ じめて単 <s:1> cDNA,ZRK1を じめて単 じめて単 じめて単 is isolated from た. This year, ZRK1を uses the functions of を て and そ to analyze を. The following ように ように rows った. Introverted き rectifier sex K ^ + チ ャ ネ ル の ゲ ー ト, も し く は introverted き rectifier sex を decided し て い る の が, K ^ + の balance potential か ら の ず れ で あ る の か ^, extracellular K + concentration と membrane potential の コ ン ビ ネ ー シ ョ ン な の か に つ い て は, not だ definitely が つ い て い な い の で, initially に こ の point を parsing し た. Culture 293 cell に ZRK1 を trnasjectl, stable に 発 now す る strains を し, consummate, inside and outside the cell の ^ K + concentration を か え る be 験 を line っ た. そ の results, K ^ + の balance potential か ら の シ フ ト で は な く ^, extracellular K + concentration と membrane potential の コ ン ビ ネ ー シ ョ ン を perception し て い る こ と が わ か っ た. The に, extracellular K^+ concentration を sensing する mechanism を knows るために, まず extracellular K^+ <s:1> binding site <e:1> is determined by を test みた. す な わ ち, こ の チ ャ ネ ル の ポ ア の extracellular に よ っ て い る と exam え ら れ る part に kind 々 の mntation を import し, parse し た. そ の results, mutant の ひ と つ は, activeness の destiny が き わ め て お そ く (large き く) な っ た の で, こ の parts が, extracellular K ^ + の interaction part と exam え ら れ た. さ ら に, こ の mutant は, excessive を つ よ く し て い く と, コ ン ダ ク タ ン ス が rise し つ づ け, pay nearly - 200 mv ま で は saturated し な い と い う specialty を shown し た. In the future, the mutant mutation analysis of the <s:1> will be promoted and the development of させる will be determined to be である.

项目成果

Yoshihiro KUBO: "Towards the elucidation of structural-functional relationship of inward rectigying K^+ channel family" Neuroscience Research. 21. 109-117 (1994)

Yoshihiro KUBO：“阐明内向整流 K^ 通道家族的结构功能关系”神经科学研究。