酵母を用いた基本転写因子TFIIDサブユニット(TAFs)の機能解析

点击翻译按钮获取中文摘要

ショウジョウバエdTAF230/出芽酵母yTAF145はそのN末端側約70アミノ酸残基から成る領域にTBP機能阻害活性を有する。またこの活性領域(TAND;TAF N-terminal domain)は機能的に異なる二個の小サブドメイン(TANDI,TANDII)に分割されるが、TANDIと酸性型の転写活性化ドメイン(AD)はいくつかのアッセイ系において互いに交換可能(機能的に等価)である。一方、転写活性化において重要な役割を果たすとされる基本転写因子TFIIAは、TBPとの結合においてTANDIIに対して競合的に作用する。他のグループによるこれまでの知見も考え合わせて、新たにTFIIDの異性化モデル(ハンドオフモデル)を提唱した。yTAF145のTANDI,II(yTANDI,II)をdTANDI,IIで置換したキメラ型TAF蛋白質は、出芽酵母細胞内において選択的な蛋白質分解を受ける。今回HA tagをN,C末端に付加することによって、この蛋白質分解がN末端側のキメラ型TANDを除去するために働いていることを明らかにした。さらに点変異体あるいはTAND重複型変異体を用いた実験から、AD,TFIIAによるTANDI,IIの逐次的な置換の阻害が蛋白質分解を誘起することが示唆された。また興味深いことにTANDはyTAF145分子のC末端側に移してもautonomousに機能するが、キメラ型TANDをC末端側に移した場合には蛋白質分解は起こらなかった。すなわちTANDの除去は特異的なプロテアーゼによる生理的な反応が顕在化したものと考えられる。またTAND欠失型yTAF_<II>145遺伝子に対して合成致死性を示す遺伝子のスクリーニングを行ったところ、TFIID,SAGAの構成成分であるTBP,TAF61及び機能未知のORFの点変異体が単離された。