リソゾームカテプシン群による神経細胞死の新たな制御機構について

溶酶体组织蛋白酶控制神经细胞死亡的新机制

• 批准号: 10176218
• 负责人: 内山 安男
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10176218/
• 关键词: リソソーム; カテプシンB; カテプシンD; オートファジー; アポトーシス; マンノース6-リン酸リセプター

PC12細胞を血清除去して培養すると、その初期からオートファジー小体を形成する。今回、このオートファジーの性質を検討した。細胞死に至る過程で、リソゾームカテプシンBとDの活性、蛋白量、細胞内における免疫反応性について調べた。培養24時間後のカテプシンBは、活性、蛋白量、その免疫反応性共に、極端に低下することが分かった。一方、カテプシンDの活性はその初期から上昇し、蛋白量は24時間の時点で約3倍になった。カテプシンDの免疫染色でみると、オートファジー小体の出現と一致して、陽性顆粒の染色性の強さ、その大きさは、共に増大した。培養24時間後にはTUNEL陽性細胞にもこの傾向はみられた。即ち、血清除去により出現したオートファジー小体/オートリソゾームでは、カテプシンBとDとのバランスが崩れていることが明らかとなった。そこで、私達は、カテプシンBおよびDのcDNAをPC12細胞に各々導入した細胞を作製した。カテプシンDの遺伝子導入PC12細胞(PC-CAT-D細胞)のクローンを一種類だけ作製することができた。この細胞を血清非存在下で培養すると、12時後の時点で、生存率は野性型細胞に比べ有意に低下した。この生存率は、カテプシンDのインヒビターであるペプスタチンAの添加で上昇した。さらに、カテプシンBの遺伝子導入PC12細胞(PC-CAT一B細胞)では、その生存活性が著しく上昇することが分かった。この生存率は、カテブシンBのインヒビターであるCA074を添加することにより低下し、ペプスタチンAをさらに添加することで元に復した。PC-CAT一B細胞を無血清条件下で24時間培養し、カテプシンBとDの蛋白量の変化をみると、カテプシンBは培養初期と比べ変化せず、Dは約2.5倍に上昇していた。以上の結果は、カテプシンBとDによって制御される、細胞死の経路の存在を支持するものであり、その経路の中では、Dは細胞死誘発因子として、また、Bはその活性を抑制する因子として作用する。

The serum of PC12 cells was removed and the corpuscles were formed in the early stage. This time, I don't know if I have sex. During the process of cell death, the activity of B-D, the amount of protein, the amount of protein, the immune response and the activity of B-D protein were detected. After 24 hours of culture, the levels of B, activity, protein content, immune reactivity, and low-end immune response were detected. On the other hand, the protein content was about 3 times higher than that at the 24-hour time point in the initial phase of the enzyme activity test. Immuno-staining showed that the corpuscles were consistent, hyperchromic, hyperchromic, hyperchromic and hyperchromic. After 24 hours of incubation, the TUNEL cells were forced to change after 24 hours of training. That is, when the serum is removed, the serum shows that the body

项目成果

Yamabe,K.: "Preservation of hypoxic liver cell necrosis by in vivo human bcl-2 gene transfection." Biochem.Biophy.Res.Comm.243. 217-223 (1998)

Yamabe,K.：“通过体内人 bcl-2 基因转染保存缺氧肝细胞坏死。”

Kawahara,A.: "Caspase-independent cell killing by Fas-associated protein with death domain." J.Cell.Biol.143. 1353-1360 (1998)

Kawahara,A.：“具有死亡结构域的 Fas 相关蛋白可实现不依赖于半胱天冬酶的细胞杀伤。”

Sastradipura,D.F.: "Identification of cellular compartments involved in processing of cathepsin E in primary cultures of rat microglia." J.Neurochem.70. 2045-2056 (1998)

Sastradipura，D.F.：“在大鼠小胶质细胞原代培养物中鉴定参与组织蛋白酶 E 加工的细胞区室。”