课题基金 / 基金详情

標的遺伝子組み換えと胚盤胞相補法によるサイトカイン受容体遺伝子の機能解析

標的遺伝子組み換えと胚盤胞相補法によるサイトカイン受容体遺伝子の機能解析
利用靶向基因重组和囊胚互补法对细胞因子受体基因进行功能分析
批准号：
06670345
负责人：
生田 宏一
金额：
$1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1994 至 --
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670345/
关键词：
IL-7レセプター標的遺伝子組み換えマウス

项目摘要

项目成果

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1 IL-7レセプター遺伝子の単離IL-7レセプターのcDNAを既知のDNA配列を参考にしてPCRにより単離した。次に、得られたcDNAをプローブとして129系マウスgenomicライブラリー200万個より染色体遺伝子を単離し、制限酵素地図作製およびDNA配列決定により遺伝子のエクソン・イントロン構造を明らかにした。IL-7レセプター染色体遺伝子は8個のエクソンから成り全長40kbの領域にまたがっていることが明らかとなった。Cモチーフを含む第2エクソンをneo遺伝子に置き換えたベクター(A)とWSモチーフを含む第5エクソンと膜貫通領域を含む第6エクソンを同時にneo遺伝子に置き換えたベクター(B)を作製した。どちらのベタク-においてもIL-7レセプター分子は完全に不活されると考えられた。ネガティブ選択としてはHSV-TK遺伝子を用いた。2 相同組み換え体の単離ES細胞(E14.1.B8)にエレクトロポレーションによりDNAを導入し、G418とFIAUにより細胞を選択し生き残ったコロニーを単離し、相同組み換えの有無をサザン法により解析した。その結果、1回目のスクリーニングでAベクターでは119個中1個の相同組み換え体が得られたが、Bベクターでは104個調べたが得られなかった。2回目のスクリーニングはAベクターに集中し、145個中2個の相同組み換え体が得られた。3 キメラマウスの作成最初に得られたES細胞は形態が悪かったのでサブクローニングし、良い形態のサブクローンを2個をC57BL/6J-Ly-5.1マウスの胚盤胞に注入しキメラマウスの作成した。その結果、その内の1クローンからキメラマウスが得られた。今後、残る2クローンを胚盤胞に注入する予定である。
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会议论文
新規IL-15依存性自然免疫系リンパ球による免疫応答と組織恒常性の制御機構
  • 批准号：
    23K27426
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
  • 资助金额：
    $6.99万
  • 财政年份：
    2024
  • 负责人：
    生田 宏一
  • 依托单位：
    Kyoto University
Control of immune response and tissue homeostasis by novel IL-15-dependent subsets of innate lymphocytes and lymphoid cells
  • 批准号：
    23H02735
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
  • 资助金额：
    $12.06万
  • 财政年份：
    2023
  • 负责人：
    生田 宏一
  • 依托单位：
    Kyoto University
ＩＬ－１５産生性ストローマ細胞の局所機能の解明
  • 批准号：
    15F15114
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
  • 资助金额：
    $1.54万
  • 财政年份：
    2015
  • 负责人：
    生田 宏一
  • 依托单位：
    Kyoto University
IL-7レセプターの発現制御による免疫監視システムの形成と維持機構
  • 批准号：
    17047021
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 资助金额：
    $6.14万
  • 财政年份：
    2005
  • 负责人：
    生田 宏一
  • 依托单位：
    Kyoto University
海外基金