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マウス発生工学によるc-mplとトロンボポイエチンを介した巨核球増殖機構の解析

マウス発生工学によるc-mplとトロンボポイエチンを介した巨核球増殖機構の解析
利用小鼠发育工程分析c-mpl和血小板生成素介导的巨核细胞增殖机制
批准号：
07272211
负责人：
生田 宏一
金额：
$1.66万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1995 至 --
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07272211/
关键词：
癌遺伝子巨核球トロンボポイエチントランスジェニックマウス

项目摘要

项目成果

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中文摘要
翻译
マウスの急性白血病ウイルスに由来する癌遺伝子c-mplのリガンドが巨核球の分化増殖と血小板産生を誘導するトロンボポイエチン(TPO)であることが解明された。本研究の目的は、TPOを持続的に産生するトランスジェニックマウスを作製し、そのストローマ細胞を用いて血小板産生を支持する培養系を確立することにある。まず、ニワトリアクチンプロモーターとサイトメガロウイルスエンハンサーを有する発現ベクターpCAGGSにヒトTPOcDNAを連結したDNA(CAG-TPO)を作製した。CAG-TPOの活性は、COS細胞にトランスフェクション後の培養上清の、Ba/F3細胞にc-mpl(TPO receptor)を発現させた細胞に対する増殖活性を測定することにより確認した(東レ基礎研究所玉腰先生、須藤先生との共同実験)。次に、ベクターを除いたDNA断片を切り出し、BDF1(C57BL/6xDBA)マウスの受精卵にマイクロインジェクションした。DNAを注入した480個の受精卵の内生き残り里親に戻したものは403個であり33匹のマウスが4週齢まで育った。それらのtail DNAをPCRで解析したところトランスジーン陽性の個体は得られなかった。トランスジーンが致死的に働いてることを示唆する結果として、1)自然分娩で誕生し翌日に死亡したマウスのうち、DNA解析が可能であった9匹のうち7匹がトランスジーン陽性であった.2)帝王切開したマウスより胎盤を回収しDNA解析をしたところ、7匹中4匹がトランスジーン陽性であった.しかしながらこれらは翌日までに食殺されていた、が得られている。
英文摘要
マウスの急性白血病ウイルスに由来する癌遺伝子c-mplのリガンドが巨核球の分化増殖と血小板産生を誘導するトロンボポイエチン(TPO)であることが解明された。本研究の目的は、TPOを持続的に産生するトランスジェニックマウスを作製し、そのストローマ細胞を用いて血小板産生を支持する培養系を確立することにある。まず、ニワトリアクチンプロモーターとサイトメガロウイルスエンハンサーを有する発現ベクターpCAGGSにヒトTPOcDNAを連結したDNA(CAG-TPO)を作製した。CAG-TPOの活性は、COS細胞にトランスフェクション後の培養上清の、Ba/F3細胞にc-mpl(TPO receptor)を発現させた細胞に対する増殖活性を測定することにより確認した(東レ基礎研究所玉腰先生、須藤先生との共同実験)。次に、ベクターを除いたDNA断片を切り出し、BDF1(C57BL/6xDBA)マウスの受精卵にマイクロインジェクションした。DNAを注入した480個の受精卵の内生き残り里親に戻したものは403個であり33匹のマウスが4週齢まで育った。それらのtail DNAをPCRで解析したところトランスジーン陽性の個体は得られなかった。トランスジーンが致死的に働いてることを示唆する結果として、1)自然分娩で誕生し翌日に死亡したマウスのうち、DNA解析が可能であった9匹のうち7匹がトランスジーン陽性であった.2)帝王切開したマウスより胎盤を回収しDNA解析をしたところ、7匹中4匹がトランスジーン陽性であった.しかしながらこれらは翌日までに食殺されていた、が得られている。
期刊论文(12)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
Kodaira,Y.et al.: "Developmental heterogeneity of Vg1.1 T cells in the mouse liver" Immunology. (in press).
Kodaira,Y.et al.：“小鼠肝脏中 Vg1.1 T 细胞的发育异质性”免疫学。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Maki,K.et al.: "Interleukin 7 receptor-deficient mice lack 8δ T cells" Proc.Natl.Acad.Sci.USA.(in press).
Maki, K. 等人：“白细胞介素 7 受体缺陷小鼠缺乏 8δ T 细胞”，美国国家科学院院刊。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Komagata,Y.et al.: "Heterogeneity of N insertion capacity in fetal hematopoietic stem cells" International Immunology. (in press).
Komagata,Y.et al.：“胎儿造血干细胞中 N 插入能力的异质性”国际免疫学。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Ikuta,K.and Komagata,Y.: "Hematopoietic stem cells:Biology and therapeutic applications" Levitt,D.J.and Mertelsmann,R., 659 (1995)
Ikuta,K. 和 Komagata,Y.：“造血干细胞：生物学和治疗应用” Levitt,D.J. 和 Mertelsmann,R.，659 (1995)
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
共 6 条
    新規IL-15依存性自然免疫系リンパ球による免疫応答と組織恒常性の制御機構
    • 批准号：
      23K27426
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
    • 资助金额：
      $6.99万
    • 财政年份：
      2024
    • 负责人：
      生田 宏一
    • 依托单位：
      Kyoto University
    Control of immune response and tissue homeostasis by novel IL-15-dependent subsets of innate lymphocytes and lymphoid cells
    • 批准号：
      23H02735
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
    • 资助金额：
      $12.06万
    • 财政年份：
      2023
    • 负责人：
      生田 宏一
    • 依托单位：
      Kyoto University
    ＩＬ－１５産生性ストローマ細胞の局所機能の解明
    • 批准号：
      15F15114
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for JSPS Fellows
    • 资助金额：
      $1.54万
    • 财政年份：
      2015
    • 负责人：
      生田 宏一
    • 依托单位：
      Kyoto University
    IL-7レセプターの発現制御による免疫監視システムの形成と維持機構
    • 批准号：
      17047021
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
    • 资助金额：
      $6.14万
    • 财政年份：
      2005
    • 负责人：
      生田 宏一
    • 依托单位：
      Kyoto University
    海外基金