先天性プロテインS異常症における血栓症発症の分子機構の解明

阐明先天性蛋白S异常血栓形成的分子机制

• 批准号: 04260210
• 负责人: 鈴木 宏治
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04260210/
• 关键词: プロテインS; プロテインC; 先天性プロテインS欠損症; 先天性血栓性素因; 血栓症; 遺伝子解析; 遺伝子異常; 先天代謝異常

プロテインS(PS)は血小板は血管内皮細胞膜上における活性化プロテインC(APC)のレセプターとなり、APCの凝固阻害活性を促進するコファクターとして機能する。PSは血液中ではその約40%は遊離型として、残りの約60%が補体系制御因子のC4b結合蛋白質(C4bp)との複合体として存在し、遊離型のみがAPCのコファクターとして機能する。一昨年、我々は世界に先駆けて血栓症を発症したPS欠損症患者で非常に希なIII型PS欠損症(コファクター活性を示す遊離型PS蛋白量に比較してコファクター活性が低値を示す症例)を発見した。昨年、患者は正常PS分子と異常PS分子を有するヘテロ接合体PS異常症であることを明らかにし、異常分子を発見地にちなんでPS徳島と呼んだ。PS徳島分子はSDS-PAGEで正常PS分子に比較して見かけ上高分子量に泳動されること、また正常PS分子に比較してトロンビンによる分解を受けにくいこと、PSのカルシウム依存性の立体構造を認識するモノクローナル抗体やトロンビン感受性ドメインを認識するモノクローナル抗体との反応性が低下していたことから、何らかの蛋白質構造あるいは糖鎖構造の異常が推定された。本年度は、PS徳島における異常を明らかにするため、患者PS遺伝子の解析を行った。患者PS遺伝子の成熟PS領域をコードする第2〜第15エクソンおよびそれらのエクソン-イントロン接合部位を含む領域をPCR法で増幅し、その塩基配列を解析した。その結果、患者PS遺伝子の偽遺伝子(β遺伝子)以外では、機能伝遺子(α遺伝子)の第6エクソンの約半数のクローンにおいてAからGへの一塩基変異を認め、他のエクソンに異常はみられなかった。この結果からPS田島分子の第2EGFドメインにLys(155)→Glu置換が生じたことが明らかになった。現在、Lys(155)をGluに変異させた組換えプロテインSを作製し、機能異常との関係を検討している。

プ ロ テ イ ン S (PS) は は platelet endothelial cell membranes に お け る activeness プ ロ テ イ ン C (APC) の レ セ プ タ ー と な り, APC の solidification resistance against active を promote す る コ フ ァ ク タ ー と し て function す る. PS は blood で は そ の about 40% は free type と し て and residual り の about 60% が filling system suppression factor の C4b binding protein (C4bp) と の complex と し て exist し type, free の み が APC の コ フ ァ ク タ ー と し て function す る. YiZuo, I 々 は world に 駆 first け て thrombosis を し 発 disease sufferer た PS owe loss で is に h. な III PS owe loss syndrome (コ フ ァ ク タ を ー activity in す free type PS protein quantity に comparison し て コ フ ァ ク タ ー active が low numerical cases を shown す) を 発 see し た. Last year, patients は normal PS と abnormal PS molecules を have す る ヘ テ ロ gametes PS abnormal disease で あ る こ と を Ming ら か に し, abnormal molecules を 発 insight に ち な ん island と で PS Howard cried ん だ. PS DE island は sds-page で normal PS molecules に compare し て see か け on high molecular weight に swimming さ れ る こ と, ま た に compared to normal PS molecules し て ト ロ ン ビ ン に よ を る decomposition by け に く い こ と, PS の カ ル シ ウ ム dependency の three-dimensional structure を know す る モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody や ト ロ ン ビ ン susceptibility ド メ イ ン を Know す る モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody と の anti 応 low sexual が し て い た こ と か ら, ら か の protein structure あ る い は sugar lock structure abnormal の が presumption さ れ た. This year, <s:1>, PS Tokushima における abnormal を clear ら にするため にするため, patient PS 伝 child <s:1> analysis を line った. Patients with PS heritage 伝 son の mature PS field を コ ー ド す る 2 ~ 15 エ ク ソ ン お よ び そ れ ら の エ ク ソ ン - イ ン ト ロ ン を joint parts including む で を PCR method raised し picture, そ の salt base with column を parsing し た. そ の results, patients with PS but 伝 の pseudo heritage 伝 child (beta heritage 伝) outside で は, function 伝 id (alpha heritage 伝) の エ 6 ク ソ ン の about half の ク ロ ー ン に お い て A か ら G へ の め, recognize A salt base - different を の エ ク ソ ン に abnormal は み ら れ な か っ た. こ の results か ら PS tajima molecular の 2 egf ド メ イ ン に Lys (155) - Glu replacement が raw じ た こ と が Ming ら か に な っ た. Now, Lys (155) を Glu に - different さ せ た group in え プ ロ テ イ ン S を as し, parafunction と の masato is を beg し 検 て い る.

项目成果

Hayashi T,Honda G,Suzuki K:"An atherogenic stimulus homocysteine inhibits cofactor activity of thrombomodulin and enhances thrombomodulin expression in human umbilical vein endothelial cells" Blood. 79. 2930-2936 (1992)

Hayashi T、Honda G、Suzuki K：“致动脉粥样硬化刺激同型半胱氨酸抑制血栓调节蛋白的辅因子活性并增强人脐静脉内皮细胞中血栓调节蛋白的表达”血液。

Wada H,Ohiwa M,Kaneko T,et al.: "Plasma thrombomodulin as a marker of vascular disorders in thrombotic thrombocytopenic purpura and disseminated intravascular coagulation." Am J Haematol. 39. 20-24 (1992)

Wada H、Ohiwa M、Kaneko T 等人：“血浆血栓调节蛋白作为血栓性血小板减少性紫癜和弥散性血管内凝血中血管疾病的标志物。”

Fujikawa K,Suzuki K: "Recent Advances In Blood Coagulation.(Cellular coagulant and anticoagulant proteins.)" Churchill Livingstone,Edinburgh(ed.by L.Poller), 316(17) (1991)

Fujikawa K、Suzuki K：“血液凝固的最新进展。（细胞凝血剂和抗凝血蛋白。）”丘吉尔利文斯通，爱丁堡（L.Poller 编辑），316（17）（1991）

Komoriya K,Inoue K,Takahashi K,Suzuki K: "Inhibitory effect of activated protein Con platelet aggregation induced by the prothrombin-converting reaction." Thromb.Res.67. 705-710 (1992)

Komoriya K、Inoue K、Takahashi K、Suzuki K：“凝血酶原转换反应诱导的活化蛋白 Con 血小板聚集的抑制作用。”

Wada H,Minamikawa K,Wakita Y,et al.: "Hemostatic study before onset of disseminated intravascular coagulation." Am J Haematol. (1993)

Wada H、Minamikawa K、Wakita Y 等：“弥散性血管内凝血发生前的止血研究”。