エンドペプチダーゼ組み合わせ法によるレセプターラベル部位の決定

内肽酶组合法测定受体标记位点

• 批准号: 08877336
• 负责人: 橋本 祐一
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08877336/
• 关键词: エンドペプチダーゼ; アフィニティラベル; レチノイン酸レセプター; プロテアーゼ; レセプター; プローブ; ケイ光標識; ペプチド; 光親和性ラベル; アフィニティーゲル; レチノイド; レチノイン酸受容体; 質量分析; 結合部位; フタルイミド; 分子認識

本年度は、提唱するエンドペプチダーゼ組み合わせ法によるレセプターラベル部位の決定法を、方法論として確立すべく、ここのステップの施行条件の最適化を図るとともに、同方法の応用・適応範囲の拡充並びにそれによる新規知見の獲得を目指した。方法論としての確立のためには、核内レチノイン酸レセプターを素材とした研究を展開した。その結果、(1) 提唱する方法に用いるラベル化剤及びその有効性を事前に検討するためのブローブの一般設計法並びに一般調製法を確立した。(2) 提唱する方法に用いるエンドプロテアーゼの一般使用法、一般反応条件などを確立すると共に、酵素反応物の一般取扱法、一般分析法を確立した。(3) 提唱する方法により一層の信頼性を付与すべく、同方法にエレクトロスプレー質量分析によるエンドプロテアーゼ消化物の分析法を導入することを検討し、これらの方法が相乗的に得られる結果の信頼性を高めることを確認し、両方法の一般的融合利用法を大旨確立した。確立した方法の応用としては、a)TNF-αの生産調節にかかわる薬物受容体の検出、b)アミノペプチダーゼN阻害剤の新たな分子標的の検出、に成果があった。すなわち、(4) TNF-αの生産促進並びに生産抑制にかかわる薬物受容体各々の検出に成功した。(5) 小分子非ペプチド型アミノペプチダーゼN(APN)阻害剤の分子標的として、APN活性を有しながらこれまでAPNとして確認されている酵素とは異なるものを発見した。

This year, we will provide guidance on how to determine the location of the site, how to optimize the conditions for the implementation of the site, and how to obtain new knowledge about the application, scope and environment of the site. The methodology was established and the materials were studied. The results are as follows: (1) The proposed method is to establish a general design method and a general modulation method for the application of the chemical and physical properties in advance. (2)The method is established by general usage method, general reaction condition, general extraction method of enzyme reaction substance and general analysis method. (3)The method of improving the reliability of the first layer and the method of improving the reliability of the second layer and the method of improving the reliability of the third layer are established. To establish the method for the detection of TNF-α production and regulation, b) the detection of TNF-α production and regulation, c) the detection of TNF-α production and regulation of TNF-α production and regulation, d) the detection of TNF-α production and regulation, d) the detection of TNF-α production and regulation, d) the detection of TNF-α production and regulation of TNF-α production and regulation, d) the detection of TNF-α production and regulation of TNF-α production and regulation, d) the detection of TNF-α production and regulation of TNF-α production and regulation, d) the detection of TNF-α production and regulation, d) the detection of TNF-α production and regulation of TNF-α production and regulation. (4) TNF-α production promotion and production inhibition, and the successful detection of various kinds of receptors. (5)Small molecule non-selective type of protein can be used to inhibit the activity of APN and its molecular target.

项目成果

H.Miyachi ら: "Tumor necrosis factor-alpha production-inhibiting activity of 〜." Bioorg.Med.Chem.5・11. 2095-2102 (1997)

H. Miyachi 等：“肿瘤坏死因子-α 的产生抑制活性~”。Bioorg.Med.Chem.5·11（1997）。

A.Azuma ら: "Photoaffinity labeling of tumor promoter-binding protein 〜" Biol.Pharm.Bull.20・1. 6-9 (1997)

A.Azuma 等：“肿瘤启动子结合蛋白的光亲和标记〜”Biol.Pharm.Bull.20·1（1997）。

T.Sasaki, Y.Hashimoto: "Photoaffinity labeling of RARs and mapping of labeled sites by〜" Methods in Mol.Biol.(印刷中). 298-305 (1998)

T.Sasaki，Y.Hashimoto：“RAR 的光亲和标记和标记位点的映射〜”《Mol.Biol. 方法》（出版中）298-305（1998 年）。

Aya Tanatani 他7名: "Novel DNA minor groove binders with an aromatic layered〜" Nucleic Acids Symposium Series. 39. 31-32 (1998)

Aya Tanatani 和其他 7 人：“具有芳香分层的新型 DNA 小沟结合物 ~”核酸研讨会系列 39. 31-32 (1998)。

T.Tashima ら: "Polyenylidene thiazolidine derivatives with retinoidal activities." Chem.Pharm.Bull.45・11. 1805-1813 (1997)

T. Tashima 等人：“具有类视黄醇活性的聚亚乙烯基噻唑烷衍生物。”Chem.Pharm.Bull.45·11 1805-1813 (1997)。