myc-tagを用いたインスリン反応性グリコーストランスポーターの構造と機能解析

使用 myc 标签对胰岛素响应性葡萄糖转运蛋白进行结构和功能分析

• 批准号: 08878091
• 负责人: 蛯名 洋介
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08878091/
• 关键词: インスリン; GLUT4; トランスロケーション; PI3-キナーゼ; グルコース取り込み

インスリンは生体へ投与後直ちに血中グルコース濃度(血糖値)を低下させることのできる唯一のホルモンであり、その作用を担っているのが膜を12回貫通するタンパクであるインスリン反応性グルコーストランスポーター(グルコーストランスポータータイプ4:GLUT4)である。インスリンはその標的組織である筋肉・脂肪細胞において、通常は細胞内膜分画に存在していたGLUT4を細胞膜表面上に移行(トランスロケーション)することにより濃度勾配に従って、グルコースを細胞内に取り込み、その結果血糖値を低下させる。このようにGLUT4は最も特徴的なインスリン作用を担う重要な分子である。インスリン結合により活性化されたインスリンレセプターチロシンキナーゼは、PI3-キナーゼを活性するがその先どのような因子が関与し、またどのような分子メカニズムでGLUT4のトランスロケーションを引き起こすのか、明らかにする事を目的とする。しかし、インスリン刺激で活性化されたPI3-キナーゼがGLUT4のトランスロケーションを引き起こすのに必要かつ十分であるのかは議論のあるところであり明らかでなかった。そこで我々はインスリンレセプターとIRS-1をほとんど発現していないRat3Y1細胞を用いインスリンシグナル伝達の再構成を試みた。3Y1細胞を安定にインスリンレセプター、IRS-1、GLUT4mycをcDNAを介して発現させた細胞を作った。その細胞はインスリン以外のNaFやPMAなどの刺激によってはGLUT4mycのトランスロケーションが起こるので、GLUT4mycをトランスロケーションさせる装置はもっているものと思われる。この細胞をインスリンで刺激するとインスリンレセプターチロシンキナーゼの活性化、IRS-1のチロシンリン酸化、PI3-キナーゼの活性化は起こるが、GLUT4mycのトランスロケーションはみられなかった。このことからRat3Y1細胞においてはPI3-キナーゼの活性化がGLUT4mycのトランスロケーションに必要かつ十分ではないことが明らかとなった。

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项目成果

蛯名洋介: "化学と生物「インスリンによる細胞内へのグリコース取り込み促進機構」" 日本農芸化学会編集 学会出版センター発行, 2 (1996)

海老名洋介：《化学与生物学胰岛素促进细胞内葡萄糖摄取的机制》日本农业化学学会编，学会出版中心出版，2（1996）

Todaka,M.,Ebina.Y.et al.: "Roles of insulin,guanosine 5′-〔γ-thio〕triphosphate and phorbol 12-myristate 13-acetate in signaling pathways of GLUT4 translocation" Biochem.J.315. 875-882 (1996)

Todaka, M., Ebina.Y. 等人：“胰岛素、鸟苷 5-[γ-硫代]三磷酸和佛波醇 12-肉豆蔻酸酯 13-乙酸酯在 GLUT4 易位信号通路中的作用”Biochem.J.315。 -882 (1996)