イムノアッセイ用ラベル剤としてのユウロピウム錯体の開発

开发铕络合物作为免疫测定标记剂

• 批准号: 08220263
• 负责人: 松本 和子
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Waseda University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08220263/
• 关键词: ユウロピウム錯体; イムノアッセイ; アルファーフェトプロテイン

本研究では、まず、様々な構造を持つ新規ユウロピウム-β-ジケトナト(R_1COCHCOR_2)蛍光錯体を合成し、それらの蛍光特性を検討することにより、β-ジケトナト-ユウロピウム錯体の蛍光強度と量子収率に及ぼすR_1とR_2の影響を明らかにした。従来法に用いられていたユウロピウム蛍光ラベル剤の欠点を克服するために、本研究ではβ-ジケトンにクロロスルホニル基を導入することにより、穏やかな条件下でタンパク質を直接標識できる新規ユウロピウム-β-ジケトナト蛍光ラベル剤を合成した。新規ラベル剤を用いて、ウシ血清アルブミン(BSA)の標識及び標識BSA-ユウロピウム溶液の蛍光特性を検討した。測定結果によって、新規ラベル剤は強い蛍光があると同時に、200μs以上の蛍光寿命を持ち、時間分解蛍光イムノアッセイのラベル剤として用いられることを明らかにした。新規ラベル剤を用いたBSAの時間分解蛍光測定は10^<-15>Mレベルの検出限界が得られ、非常に高い感度を有することを示した。新規ラベル剤を用いて、ストレプトアビジン(SA)、ウサギ抗ヒトα-フェトプロテイン(AFP)抗体及びメタンフェタミン-BSA結合体を標識し、ヒト血清中のAFPと免疫グロブリンE(IgE)及びヒト尿中のメタンフェタミン(MA)を測定した。新規ラベル剤を用いる時間分解蛍光イムノアッセイによるAFP、IgE及びMAの測定はそれぞれ1.0x10^<-6>ng/ml(AFP)、7.0x10^<-4>IU/ml(IgE)と25pg/assay(MA)の検出限界を示し、従来のラジオイムノアッセイやエンザイムイムノアッセイより、2-5桁の高い感度を有することを明らかにした。

In this study, we synthesized a new optical complex based on the new structure of the β-itronato (R_1COCHCOR_2) and analyzed its optical properties to clarify the effects of R_1 and R_2 on the optical intensity and quantum yield of the β-itronato-optical complex. In order to overcome the shortcomings of the new method, this study introduced β- The new formulation is used to identify and evaluate the optical properties of serum albumin (BSA) solutions. The measurement results show that the new light source has a light lifetime of more than 200μs, and the time decomposition light source has a light lifetime of more than 200μs. The time resolved photometric determination of BSA in the new classification system is 10^<-15>M. The detection limit of BSA is obtained, and the sensitivity is very high. The new assay was used to identify AFP antibodies and BSA conjugates, and to determine AFP, IgE and MA in serum and urine. The detection limits for AFP, IgE and MA are 1.0x10^<-6>ng/ml(AFP), 7.0x10^ IU<-4>/ml(IgE) and 2-5 pg/assay(MA).

项目成果

Jingli Yuan.Kazuko Matsumoto: "Synthesis of a New Tetradentate β-Diketonate-Europium Chelate and Its Application for Time-Resolved Fluorometry of Albumin" J.Pharma.Biomedical Anal.(in press). (1997)

Jingli Yuan. Kazuko Matsumoto：“新型四齿β-二酮酸铕螯合物的合成及其在白蛋白时间分辨荧光测定中的应用”J.Pharma.Biomedical Anal.（出版中）。

Jingli Yuan.Kazuko Matsumoto: "Fluorescence Enhancement by Electron-Withdrawing Groups on β-Diketones in Eu(III)-β-diketonato-topo Ternary Complexes" Anal.Sci.12. 31-36 (1996)

Jingli Yuan. Kazuko Matsumoto：“Eu(III)-β-二酮拓扑三元复合物中 β-二酮的荧光增强”Anal.Sci.12（1996）。

Jingli Yuan.Kazuko Matsumoto: "Synthesis of a New Tetradentate β-Diketonate-Europium Chelate That Can Be Covalently Bound to Proteins in Time-Resolved Fluorometry" Anal.Sci.12. 695-699 (1996)

Jingli Yuan. Kazuko Matsumoto：“可在时间分辨荧光法中与蛋白质共价结合的新型四齿 β-二酮酸铕螯合物的合成”Anal.Sci.12（1996）。