利用纤连蛋白自组装结构域构建新型功能性细胞外超结构-猫眼课题宝

利用纤连蛋白自组装结构域构建新型功能性细胞外超结构

批准号：

08231268

负责人：

関口清俊

金额：

$1.02万

依托单位：

Research Institute, Osaka Medical Center for Maternal and Child Health

依托单位国家：

日本

项目类别：

Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas

财政年份：

1996

资助国家：

日本

项目状态：

已结题

起止时间：

1996 至 --

来源：

https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08231268/

关键词：

細胞外マトリックスフィブロネクチン遺伝子工学マトリックス工学細胞増殖因子創傷治療セメントイン

项目摘要

项目成果

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昨年度に引き続き、フィブロネクチンの自己会合ドメインを利用した機能蛋白質の細胞外マトリックスへの不溶化技術の開発を進めた。今年度は、1)細胞外マトリックスへの不溶可能を持つ細胞増殖因子の調製とその生理活性の評価、2)従来の方法に比べてより安定に機能蛋白質を細胞外マトリックスに不溶化する新しい方法の開発、の2点について重点的に研究を行い、以下の成果を得た。【1】これまでに作成した「挿入型」キメラ蛋白質調製用ベクターにヒトTGF-αのcDNAを組み込み、これをヒト癌細胞HT1080に導入して、TGF-αとフィブロネクチン自己会合ドメインのキメラ蛋白質を発現させた。このキメラ蛋白質は、これまでに作成したキメラ蛋白質と同様、細胞外マトリックスへの不溶化能を保持しており、インタクトなTGF-αと同程度の細胞増殖促進活性を有していた。また、このキメラ蛋白質はTGF-αのもつ細胞遊走促進活性、細胞形質転換活性も保持していた。これらの結果は、このキメラ蛋白質が創傷治癒の促進剤として利用可能であることを示唆している。【2】これまでに作成したフィブロネクチンの自己会合ドメインとのキメラ蛋白質は、細胞外マトリックスに不溶化されるものの、インタクトなフィブロネクチンに比べるとマトリックスに保持されにくいという欠点をもつ。この点を解決するため、トランスグルタミナーゼのよい基質であるセメントインペプチドを組み込んだ改良型キメラ蛋白質発現用ベクターを試作した。このベクターをマウスL細胞に強制発現させたところ、対照のキメラ蛋白質に比べてマトリックスへの不溶化効率が増加しており、セメントインペプチドがキメラ蛋白質のマトリックスへの安定な組織化に有用であることが示唆された。

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