ヒト癌におけるalternative splicingの脱制御の検証

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1.ヒト肝細胞癌におけるフィブロネクチンmRNA前駆体の3可変領域(EDーA、EDーB、IIICS)でのalternative splicingのパターンをヌクレアーゼプロテクション法により検討した。その結果、EDーA領域だけでなく、EDーB、IIICS領域でのalternative splicingも癌胎児性の制御をうけていることが判明した。特に、EDーB領域の場合、EDーB^+ mRNAは正常肝、非癌肝(肝硬変、慢性肝炎)では発現しておらず、胎児肝と悪性度の高い肝細胞癌でのみ、高い発現が認められた。悪性度の高い肝細胞癌の多くは、EDーA^+ mRNA、EDーB^+ mRNAのどちらも発現が増加していたが、中にはEDーA^+ mRNAだけ、あるいはED-B^+ mRNAだけが増加している症例があり、このようなED領域でのalternative splicingのパターンの違いが予後とどのように関係しているかは、今後の検討課題である。2.フィブロネクチンmRNA前駆体のalternative splcingの脱制御が、肝細胞癌以外の癌でも起こっているかどうかを、肺癌と腎癌について検討した。肺癌の場合、EDーA^+ mRNAの発現率の有意な増加は観察されなかったが、EDーB^+ mRNAの発現は、組織型を問わず、調べたすべての症例で増加していた。一方、腎癌の場合は、EDーA^+ mRNA、EDーB^+ mRNAのどちらの発現も非癌組織と有意な差が認められなかった。このように、フィブロネクチンmRNA前駆体のalternative splicingは、組織特異的、かつ、部位特異的な癌性修飾をうけることが明かとなった。3.EDーBペプチドを特異的に認識する単クローン抗体を作成することに成功した。この抗体を用いることにより、種々の癌組織におけるEDーB^+ mRNAの発現を免疫組織化学的に検索することが可能となった。