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アポ型チロシナーゼを配位空間として用いた新規金属酵素の創成

使用脱辅基酪氨酸酶作为配位空间创建新型金属酶

基本信息

批准号：
18033045
负责人：
伊東忍
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Osaka City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では,最近コウジ菌から発見されたアポ型チロシナーゼの活性中心を柔軟配位空間として利用した新規金属酵素の創成について検討を行った。本年度は前年度に精製して得られたアポ型チロシナーゼを用いて銅(II)イオンによる再構成チロシナーゼの調製を行い,原子吸光スペクトルなどを用いて,二個の銅イオンが活性中心に導入されているかどうかについて検討した。次に得られたホロ型チロシナーゼの酸化機能(特にフェノール類の酸素化反応)について速度論的に検討し,芳香族求電子置換反応機能で進行していることを明らかにすると共に,他のチロシナーゼの場合と比較検討した。一方,アポ型チロシナーゼを加水分解酵素あるいは酸(pH〜3)で前処理することにより,酵素の触媒活性が飛躍的に向上することを見出し,それらの活性化メカニズムについて詳細に検討した。さらに,銅(II)イオン以外の遷移金属イオン(鉄(II),ニッケル(II),コバルト(II)など)によるアポ型チロシナーゼの再構成についても同様に検討し,チロシナーゼ活性について系統的に検討した。しかし,現時点では銅(II)イオンで再構成したアポ型チロシナーゼの活性を上回るものは得られていない。同様の二核銅活性中心を有する酸素運搬タンパク質ヘモシアニンの機能改変についても合わせて検討を行い,尿素や加水分解酵素で前処理することによりチロシナーゼ活性が発現することを見出し,その酸化反応機構を明らかにした。

In this study, recently, we have seen that the active center of the active center, the flexible coordination space, the active center, the active center and the active center. In the previous year of this year, we obtained the result that we have received the following information in the previous year. In the previous year, we have obtained the result that we have won the market price in the previous year. In the previous year, we have obtained the result that the II has been converted into a real estate, the atomic absorption machine has been used, and the two active centers have been registered in the retail market. The most important thing is that the acidizing machine can improve the speed theory, and the aromatic electronic counter machine can realize the performance of the equipment. On one side, the hydrolytic enzyme (pH~3) is added to the water-decomposing enzyme, and the enzyme is active. The enzyme is active and active. In addition to the transfer of metals (II, II, II) in addition to (II), the temperature is reduced to the same level as that of the active system. This is true, and the time-to-point response (II) response is then changed into an emergency response. The last time you failed, you were able to do so again. In the same binuclear active center, there is an acid transfer mechanism that can improve the performance of the enzyme. Before adding the water-decomposing enzyme to urea, the reaction temperature can be detected, and the acidizing reaction mechanism can be verified.